Phng Pháp in di
Electrophoresis
Trình : Trng Tn Tài
Ni dung
in di ?
A. C s c bn ca đin di.
B. Gii thiu k thut đin di ph bin nht.
in di Agarose
A. Gii thiu Agarose và Agarose gel
B. Nguyên tc
C. Các yu t nh hng
D. Cu trúc ca thit b đin di
E. m pH
F. Qui trình đin di
G. Mtứsứphngứphápứthuứhi DNA tứagarose gel
H.ứngứdngứcaứđinứdiứAgaroseứGel
K. u đim – nhc đim
Ni dung
III. in di polyacrylamide gel.
A. Nguyên tcứđin di polyacrylamide gel
B. in di acid nucleic
C. Cuứtrúcứthitứbứđin di polyacrylamide gel
D. Phngứpháp đinứdiứpolyacrylamideứgelứkhôngứbinứtính
I
V. Video tham kho
V
. vn
VI. Tài liu tham kho
I. in di là gì ?
 in di là hin tng các phân t trên giá th b
dch chuyn khi có dòng đin chy qua.

kứthutứđinứdiứtrênứgiáứrn
(agaroseứhocứ
polyacrylamide)
đcứsứdngứphứbinứnht
.
 Kứthutứnàyứsứdngứmtứdungứdchứđmứđứdnứđinứ
vàứtoứđinứtrngứđu,ứmtứbnứgelứđứphânứtáchứcácứ
phânứtứvàứcácứchtứnhumứkhácứnhauứđứphátứhinứvứtríứ
cácứphânứtứtrênứgelứsauứkhiứđinứdi.ứTrongứđó,ứ
polyacrylamideứgelứđcứdùngứđứphânứtáchứcácứphânứtứ
proteinứvàứcácứphânứtứDNAứcóứchiuứdàiứ<1 kb, còn
agaroseứgelứphânứtáchứhiuứquứcácứphânứtứDNAứhocứ
RNAứcóứkíchứthcứtứ20 bp-20 kb.
II. in di Agarose gel
A.
Gii thiu Agarose và Agarose gel

 Gii thích và lí lun:
- Agarose cóứkhiứlngứphânứtứxpứxứ120.000
Dalton,ứlàứmtứtrongứhaiứthànhứphnứchínhứcaứagarứ
chimứkhongứ70%,ứphnứkiaứlàứagaropectinứchimứ
khongứ30%.
- Agarose làứmtứpolymerứmchứthngứkhôngứbứ
sulphateứhóaứchaứhaiứgcứxenứkứnhauứlàứD-
galactose và 3,6-anhydro-L-galactose.

C ch to cu trúc Agarose Gel
 Agaroseứgelứlàứmtứchtứtrongứsutứhocứtrongứm,ứ
toứthànhứkhiứhnứhpứagaroseứvàứncứ(hocứđmứ
đinứdi)ứđcứđunứnóngứtiứ> 

nng đ thp ca thuc nhum hunh quang ethidium
bromide (EtBr).

 Phng pháp 2: Có th phát hinứdiứánhứsángứtứngoi.
Gel nhum màu ethidium mt chp nh di tia UV
C. Các yu t nh hng
 Kích thc ca phân t
 Khi M  v.

 CácứphânứtứDNAứmchứthngứ
siứđôiứđiứquaứbnứgelứứcácứ
tc đứtứlứnghchứviứhàmứ
log10ứcaứkhiứlngứphânứtứ
ca chúng.

 Tham kho hình biu din
mi liên h gia kích thc
DNA và đ linh đng đin li
ca nó.
C. Các yu t nh hng
 Nng đ Agarose
 on DNA mang kích
thc khác nhau dch
chuyn ứcác tc đứ
khác nhau qua các
bn gel cha các
nng đứagarose khác
nhau.

 Các thông s đin li


. Nói chung, agarose gel
thng chy ứnhit đ phòng.
D. Cu trúc ca thit b đin di
 Thitứbứđinứdiứagaroseứgelứgmứ3 bứphnứcứbn:ứ
np,ứkhayứvnứhànhứvàứbungứđinứdi.ứ

 Np:ứtrênứnpứcóứđuứraứcaứdâyứcápứđinứniứđinứccứtrênứ
bungứđinứdiứviứngunứđin.ứ

 Khay vnứhànhứbaoứgm:ứkhayứđứgel,ứkhuônứđứgel,ứlc.

 Bungứđinứdi:ứlàứniứđtứgelứtrongứquáứtrìnhứđinứdi.ứBungứ
cóứrãnhứđứcàiứlc,ứhaiứđinứccứtoứraứđinứtrngứtrongứ
dungứdch.
D. Cu trúc ca thit b đin di
Cu trúc thit b đin di Agarose gel

E. m pH
 Mt s đm đin di DNA thích hp: Tris-acetate-
EDTA (TAE), Tris-borate-EDTA (TBE) và Tris-
phosphate-EDTA (TPE) ứnngứđứkhongứ50ứmM
vàứpH 7,5-7,8.
 m TAE đc s dng nhiu nht nhng kh
nng đm li thp nht. m TBE và TPE đu có
kh nng hòa tan tt các đon DNA và kh nng
đm cao hn.
 CácứđonứDNAứsứdchứchuynứviứcácứtcứđứhiứ
khácứnhauứtrongứbaứloiứđmứtrên.ứ
 mứgiúpứthitứlpứmtứgiáứtrứpH,ứcungứcpứcácứionứ