BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KH&CN VIỆT NAM
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC

CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƯỚC KC.04.21/06-10

BÁO CÁO TỔNG HỢP
KẾT QUẢ KHOA HỌC CÔNG NGHỆ ĐỀ TÀI:

“NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ HIỆU LỰC CỦA
INTERLEUKIN-2 TÁI TỔ HỢP SẢN XUẤT TẠI VIỆT NAM
DÙNG TRONG HỖ TRỢ ĐIỀU TRỊ UNG THƯ”
(MÃ SỐ: KC.04.21/06-10) Cơ quan chủ trì đề tài: Viện Công nghệ sinh học
Chủ nhiệm đề tài: PGS. TS. Trương Nam Hải
8414
Hà Nội – 2010Bản báo cáo hoàn thành ngày 08/12/2010.
Tài liệu này được chuẩn bị trên cơ sở kết quả thực hiện Đề tài cấp Nhà nước, mã số KC.04.21/06-10.
Mọi sao chép phải được sự đồng ý của Viện Công nghệ sinh học.
BỘ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆN KH&CN VIỆT NAM
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC

CHƯƠNG TRÌNH KHCN CẤP NHÀ NƯỚC KC.04.21/06-10

BÁO CÁO TỔNG HỢP


nghệ gen, Viện Công nghệ sinh học, cùng toàn bộ các thành viên của
Đề tài đã tích cực tham gia và hỗ trợ cho công trình nghiên cứu này.

CƠ QUAN CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI
VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC

CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI PGS. TS. Trương Nam Hải

Danh sách thực tế các thành viên tham gia
trong Đề tài KC. 04.21/06-10
Số
TT
Tên cá nhân đã tham gia thực
hiện
Cơ quan

phẩm số 1
Tham gia
18 ThS. Hoàng Văn Thái
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1
Tham gia
19 Chu Văn Hanh
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1
Tham gia
20 Vũ Thành Nam
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1
Tham gia

21 CN. Mai Thu Hoài
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1
Tham gia
22 TS. Đỗ Thủy Ngân
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1
Tham gia
23 CN. Nguyễn Hoàng Mai
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1
Tham gia
24 ThS. Nguyễn Thu Hằng
Công ty Vắc xin và Sinh
phẩm số 1


Tên tổ chức đang công tác: Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và
Công nghệ Việt Nam.
Địa chỉ tổ chức: 18, Đường Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội.
Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10

ii

Địa chỉ nhà riêng: Xóm 6ª, xã Cổ Nhuế, huyện Từ Liêm, Hà Nội.
3. Tổ chức chủ trì đề tài:
Tên tổ chức chủ trì đề tài: Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học và Công
nghệ Việt Nam.
Điện thoại : 04 37562790 Fax : 04 38363144 E-mail :
.
Website:

Địa chỉ: 18, Đường Hoàng Quốc Việt, Cầu Giấy, Hà Nội.
Họ và tên thủ trưởng tổ chức: PGS. TS. Trương Nam Hải.
Số tài khoản: 931-01-064.
Ngân hàng: Kho bạc Nhà nước, Ba Đình, Hà Nội.
Tên cơ quan chủ quản đề tài: Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam
II. TÌNH HÌNH THỰC HIỆN
1. Thời gian thực hiện đề tài :
- Theo Hợp đồng đã ký kết : từ 1 tháng 1 năm 2009 đến tháng 12 năm 2010
- Thực tế thực hi
ện : từ 6 tháng 2 năm 2009 đến tháng 12 năm 2010.
- 2. Kinh phí và sử dụng kinh phí :
a) Tổng số kinh phí thực hiện : 3500 tr.đ, trong đó :
+ Kính phí hỗ trợ từ SNKH : 3500.tr.đ.
+ Kinh phí từ các nguồn khác : 0.tr.đ.


Tiết kiệm 09-
10
132,569780
c) Kết quả sử dụng kinh phí theo các khoản chi:
Đối với đề tài: 3367,00322 tr.đ
Đơn vị tính: Triệu đồng
Theo kế hoạch Thực tế đạt được
Số
TT
Nội dung
các khoản chi
Tổng SNKH Nguồn
khác
Tổng SNK
H
Nguồn
khác
1 Trả công lao động
(khoa học, phổ
thông)
1450,00 1450,00 1334,508
2 Nguyên, vật liệu,
năng lượng
1405,00 1405,00 1402,983
3 Thiết bị, máy móc 500,00 500,00 488,600
4 Xây dựng, sửa chữa
nhỏ

5 Chi khác 145,00 145,00 140,912

2 Số 2025/QĐ-BKHCN, ngày
16/09/2008
Quyết định phê duyệt kinh phí đề tài

3 Số 1642/QĐ-BKHCN, ngày
31/07/2008
Quyết định thành lập Hội đồng và
Biên bản họp Hội đồng tuyển chọn
(xét chọn) đề tài

4 Số 21/2009/HĐ ĐTCT-
KC.04/06-10, ngày 6/02/2009
Hợp đồng NKH&PTCN

5 Số 518/QĐ-CNSH, ngày
18/11/2010
Quyết định về việc thành lập Hội
đồng nghiệm thu cấp cơ sở Quy trình
Khoa học Công nghệ

6 Số 522/QĐ-CNSH, ngày
22/11/2010
Quyết định về việc thành lập Hội
đồng nghiệm thu cấp cơ sở Đề tài
khoa học cấp Nhà nước

4. Tổ chức phối hợp thực hiện đề tài:
Số
TT
Tên tổ chức

sản phẩm IL-2
Chủng vi sinh tái
tổ hợp tạo IL-2,
các quy trình để
sả
n xuất được IL-2
tái tổ hợp, các quy
trình và phương
pháp kiểm tra an
toàn, chất lượng
cho sản phẩm IL-2

2 Công ty
Văcxin và
Sinh phẩm
Số 1
Công ty
Văcxin và
Sinh phẩm
Số 1
Sản xuất thử nghiệm sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp
trên quy mô sản xuất thử
nghiệm tại phòng sản
xuất đạt tiêu chuẩn
GMP
Các quy trình sản
xuất trên qui mô
sản xuất thử
nghiệm, hồ sơ 05

của IL-2 lên tế bào
lympho người
Kết quả thử
nghiệm trên động
vật ung thư thực
nghiệm

5. Cá nhân tham gia thực hiện đề tài:
(Người tham gia thực hiện đề tài thuộc tổ chức chủ trì và cơ quan phối hợp, không quá 10
người kể cả chủ nhiệm)
Số
TT
Tên cá nhân đăng ký theo
Thuyết minh
Tên cá nhân đã tham gia
thực hiện
Nội dung
tham gia
chính
Ghi
chú
1 PGS. TS. Trương Nam Hải PGS. TS. Trương Nam Hải Chủ nhiệm
2 TS. Phạm Bích Hợp KS. Lê Thi Lan Anh Tham gia (*)
3 TS. Lê Thị Thu Hồng NCS. Vũ Minh Đức Tham gia (*)
4 TS. Đỗ Thị Thảo TS. Đỗ Thị Thảo Tham gia
5 ThS. Trần Ngọc Tân NCS. Trần Ngọc Tân Thư ký
6 ThS. Nguyễn Hồng Thanh ThS. Nguyễn Hồng Thanh Tham gia
7 TS. BS. Lê Văn Đông TS. BS. Lê Văn Đông Tham gia
8 GS. TSKH. Nguyễn Thu Vân GS. TSKH. Nguyễn Thu Vân Tham gia
9 TS. Nguyễn Tuyết Nga ThS. Lưu Anh Chiến Tham gia (*)

protein IL-2 tái tổ hợp (11/2009,
4 triệu, Viện CNSH)
Đánh giá phương pháp tinh chế
protein IL-2 tái tổ hợp (11/2009, 4
triệu, Viện CNSH)

Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10

vi

3
Đánh giá phương pháp kiểm định
sản phẩm IL-2 protein tái tổ hợp
(6/2010, 4 triệu, Viện CNSH)
Đánh giá phương pháp kiểm định
sản phẩm IL-2 protein tái tổ hợp
(9/2010, 4 triệu, Viện CNSH)

4
Đánh giá phương pháp thử
nghiệm tiền lâm sàng với sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp (10/2010, 4
triệu, Viện CNSH)
Đánh giá phương pháp thử nghiệm
tiền lâm sàng với sản phẩm IL-2 tái
tổ hợp (11/2010, 4 triệu, Viện
CNSH)

8. Tóm tắt các nội dung, công việc chủ yếu:
(Nêu tại mục 15 của thuyết minh, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát

1. B Xác định các thông số kỹ thuật
của quá trình lên men 2 dòng tế
bào E. coli và P. pastoris từ quy
mô bình tam giác đến quy mô nồi
lên men.

3/2009-
5/2009
3/2009-
5/2009
Trần Ngọc Tân,
Vũ Minh Đức, Lê
Thị Lan Anh (Viện
CNSH)
1. C Đánh giá và so sánh hiệu suất tổng
hợp sản phẩm IL-2 tái tổ hợp từ
hai dòng tế bào biểu hiện trên.
5/2009-
6/2009
5/2009-
10/2009
Trần Ngọc Tân,
Vũ Minh Đức, Lê
Thị Lan Anh (Viện
CNSH)
2.A Thiết lập các điều kiện, các chỉ
tiêu trong quy trình sản xuất IL-2
tái tổ hợp ở phòng thí nghiệm.

6/2009-

Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10

vii

hợp tại phòng sản xuất đạt tiêu
chuẩn GMP

CNSH) Nguyễn
Thu Vân, Lưu Anh
Chiến
(CTVX&SP)
3.A Xác định hiệu lực của sản phẩm
IL-2 tái tổ hợp trên mô hình tế bào
nuôi cấy in vitro

1/2010-
10/2010
1/2010-
10/2010
Đỗ Thị Thảo,
Nguyễn Hồng
Thanh (Viện
CNSH)
3.B Đánh giá hoạt tính sinh học của
sản phẩm IL-2 tái tổ hợp lên các tế
bào lympho người trong phòng thí
nghiệm.

7/2010 –
10/2010

thư của IL-2 tái tổ hợp trên động
vật gây ung thư thực nghiệm

10/2009-
10/2010
6/2010-
10/2010
Nguyễn Thị Quỳ
(ĐH-KHTN)
4.B So sánh được tác dụng của sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp với sản phẩm
IL-2 thương phẩm trên động vật
gây ung thư thực nghiệm
7/2009-
10/2010
6/2010-
10/2010
Nguyễn Thị Quỳ
(ĐH-KHTN)
III. SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI
1. Sản phẩm KH&CN đã tạo ra:
a) Sản phẩm Dạng I:
Số
TT
Tên sản phẩm và
chỉ tiêu chất
lượng chủ yếu
Đơn
vị đo
Số lượng

số kỹ thuật đúng theo
yêu cầu
Ổn định và tạo ra
sản phẩm với các
thông số kỹ thuật
đúng theo yêu cầu

2 Quy trình lên men
MWCB tổng hợp IL-2
tái tổ hợp
Ổn định và đủ các
thông số kỹ thuật cần
thiết và chi tiết về
phương pháp tiến
hành
Ổn định và đủ các
thông số kỹ thuật
cần thiết và chi tiết
về phương pháp tiến
hành
(Vượt
mức 200
mg/lít)
3 Quy trình tinh chế IL-2
ở quy mô phòng thí
nghiệm
Ổn định và đủ các
thông số kỹ thuật cần
thiết và chi tiết về
phương pháp tiến


6 Quy trình chuẩn kiểm
tra khối lượng phân tử
và tính miễn dịch IL-2
tái tổ hợp
Ổn định, đầy đủ và
chi tiết các thông số,
trình tự tiến hành
Ổn định, đầy đủ và
chi tiết các thông số,
trình tự tiến hành

7 Quy trình chuẩn kiểm
tra hiệu lực sản phầm
IL-2 tái tổ hợp
Ổn định, đầy đủ và
chi tiết các thông số,
trình tự tiến hành
Ổn định, đầy đủ và
chi tiết các thông số,
trình tự tiến hành

8 Quy trình chuẩn xác
định độ quá mẫn
Ổn định, đầy đủ và
chi tiết các thông số,
trình tự tiến hành
Ổn định, đầy đủ và
chi tiết các thông số,
trình tự tiến hành

đạt chuẩn GMP.
Ổn định và có đủ các
thông số kỹ thuật, ổn
định, an toàn để sản
xuất IL-2 tái tổ hợp
đạt chuẩn GMP.

12 Phương pháp nghiên
cứu tác động của IL-2
tái tổ hợp lên động vật
ung thư thực nghiệm
Phương pháp nghiên
cứu chi tiết, rõ ang
Phương pháp nghiên
cứu chi tiết, rõ ang

13 Bảng tiêu chuẩn cơ sở
cho IL-2 tái tổ hợp về
các mặt vô khuẩn, lý
hóa, an toàn, công hiệu
Chi tiết về thông số
các mặt vô khuẩn, lý
hoá, an toàn và công
hiệu
Chi tiết về thông số
các mặt vô khuẩn, lý
hoá, an toàn và công
hiệu

14 Hồ sơ sản xuất 05 loạt

định.
Đạt chỉ tiêu do Viện
Kiểm nghiệm thuốc
Trung Ương kiểm
định.

17 Hồ sơ kiểm định sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp từ
cơ quan kiểm định
nước ngoài
Đạt tiêu chuẩn quốc
tế (theo dược điển
Trung Quốc)
Đạt một số tiêu
chuẩn quốc tế và cơ
sở (theo dược điển
Trung Quốc)

c) Sản phẩm Dạng III:
Yêu cầu khoa học
cần đạt
Số
TT
Tên sản phẩm
Theo
kế hoạch
Thực tế
đạt được
Số lượng,
nơi công bố

được
Ghi chú
(Thời gian
kết thúc)
1 Cử nhân 0 01 2009
2 Thạc sỹ 01 01 2009
3 Tiến sỹ 01 01 2012

đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp, quyền đối với
giống cây trồng:
Kết quả
Số
TT
Tên sản phẩm
đăng ký
Theo
kế hoạch
Thực tế
đạt được
Ghi chú
(Thời gian
kết thúc)
1
Cyclodextrin: Thành phần hữu
hiệu trong công thức tạo sinh
phẩm IL-2 người tái tổ hợp
01 01 2012

2. Đánh giá về hiệu quả do đề tài mang lại:
a) Hiệu quả về khoa học và công nghệ:

- Góp phần thúc đẩy quá trình tự lực sản xuất được sản phẩm công nghệ
cao là IL-2 tái tổ hợp trong nước. Trên cơ sở đó, tạo triển vọng mới cho
các sản phẩm khác cũng theo con
đường công nghệ gen tái tổ hợp tại
Việt Nam.
3. Tình hình thực hiện chế độ báo cáo, kiểm tra của đề tài, dự án:
Số
TT
Nội dung
Thời gian
thực hiện
Ghi chú
(Tóm tắt kết quả, kết luận
chính, người chủ trì…)

Báo cáo định kỳ

I
Lần 1:
(1)

Dòng tế bào E. coli mang
vector biểu hiện gen il-2
(2) Các thông số kỹ thuật của quá
trình lên men 2 dòng tế bào E.
6/2009
(1) Dòng tế bào mang vector
biểu hiện chứa đúng trình tự
ADN mã hóa cho IL-2 tái tổ
hợp

lượng và an toàn cho sản phẩm
IL-2 tái tổ hợp
(5) Báo cáo hội thảo chuyên môn
(6) Xác định hiệu lực của sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp trên mô
hình tế bào nuôi cấy in vitro
(7) Thử nghiệm hoạt tính kháng
ung thư của IL-2 tái tổ hợp trên
động vật gây ung thư thực
nghiệm 12/2009
(1) Kết quả các thông số Ph,
thời điểm cảm ứng, Feed
tắng sinh khối cho quá trình
lên men (04 chuyên đề khoa
học)
(2) Kết quả về hiệu suất tạo sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp của 2
dòng tế bào E. coli và P.
pastoris
(3) Hoàn thành 01 chuyên đề
khoa học
(4) Hoàn thành 01 chuyên đề
khoa học
(5) Hoàn thành báo cáo hội thảo
chuyên môn
(6) Duy trì được dòng tế bào
CTLL2


vector biểu hiện gen il-2
(2) Các thông số kỹ thuật của quá
trình lên men 2 dòng tế bào E.
coli và P. pastoris
(3) Các quy trình để tinh chế được
IL-2 tái tổ hợp từ MWCB.
(4) Hội thảo chuyên môn

tự ADN mã hóa cho IL-2
tái tổ hợp.
(2) Hoàn thành 05 chuyên đề
khoa học
(3) Hoàn thành 02 chuyên đề
khoa học
(4) Đã tổ chức hội thảo
chuyên môn 1
Chủ trì: PGS. TS. Trương
Nam Hải

Lần 2
(1) Các thông số kỹ thuật của quá
trình lên men 2 dòng tế bào
(2) Bảng số liệu so sánh về khả
năng ảnh hưởng đến hiệu quả lên
men giữa 2 dòng tế bào E. coli và
P. pastoris
(3) Các quy trình để tinh chế được
IL-2 tái tổ hợp từ MWCB.
(4) Các SOP để đánh giá chất

động vật thí nghiệm
Đề tài cần đẩy nhanh tiến độ
Chủ trì: PGS. TS. Trương Nam
Hải

Lần 3
(1) Các quy trình để tinh chế
được IL-2 tái tổ hợp từ
MWCB
(2) Các SOP để đánh giá chất
lượng và an toàn cho sản
phẩm IL-2 tái tổ hợp

7/2010
(1) Hoàn thành 05 chuyên
đề khoa học
(2) Hoàn thành 03 chuyên
đề khoa học
Đề tài cần đẩy nhanh tiến độ
hơn nữa
Chủ trì: PGS. TS. Trương Nam
Hải
Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10

xiv

III
Nghiệm thu cơ sở 11/2010
IV
Nghiệm thu cấp Nhà nước 01/2011

1.2.1. Cấu trúc gen của IL-2 của người 25
1.2.2. Mối quan hệ giữa cấu trúc và chức năng của IL-2 người 25
1.2.3. Ứng dụng của IL-2 trong điều trị 28
1.2.3.1. Điều trị ung thư biểu mô tế bào thận và u hắc tố ác tính 29
1.2.3.2. Điều trị bệnh nhân nhiễm HIV 31
1.3. Sản xuất Interleukin-2 tái tổ hợp 33
1.3.1. Công nghệ sản xuất trên thế giới 34
1.3.2. Sản xuất tại Việt Nam 35
CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 37
2.1. Vật liệu 37
2.1.1. Vật liệu sinh học (chủng vi sinh vật, vector, động vật thí nghiệm) 37
2.1.2. Các loại vật tư, hóa chất và sinh phẩm 38
2.1.3. Máy móc và thiết bị 40
2.2. Phương pháp nghiên cứu 46
2.2.1. Kỹ thuật PCR 46
2.2.2. Tách dòng gen trong vecor đầu bằng pJET1/Blunt 46
2.2.3. Phương pháp cắt và nối ghép gen vào vector pET22b(+) 47
2.2.4. Phương pháp biến nạp gen vào tế bào E. coli 48
2.2.5. Phương pháp tách chiết DNA plasmid 49
2.2.6. Phương pháp biểu hiện gen il-2 dạng đơn trong tế bào vi khuẩn E. coli 50
2.2.7. Lên men tạo sản phẩm IL-2 với dòng tế bào E. coli 50
2.2.8. Phá tế bào E. coli và xử lý IL-2 thô tiền tinh chế 51
Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10

2
2.2.9. Phương pháp biểu hiện gen il-2 trong tế bào P. Pastoris 52
2.2.10. Lên men tạo sản phẩm IL-2 với dòng tế bào P. pastoris 52

3.1.3. Biểu hiện gen il-2 đơn trong tế bào E. coli BL21 77
3.1.4. Kiểm tra lại dòng tế bào E. coli sử dụng làm MCB. 78
3.1.5. Tối ưu quá trình tạo sản phẩm IL-2 tái tổ hợp dạng thô 80
3.1.5.1. Tối ưu dòng tế bào vi khuẩn E. coli 80
3.1.5.2. Tối ưu dòng tế bào nấm men P. pastoris 87
3.1.6. Đánh giá và so sánh hiệu quả tổng hợp sản phẩm IL-2 tái tổ hợp từ hai dòng tế bào E. coli và P.
pastoris 96

Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10

3
3.1.6.1. So sánh chất lượng IL-2 của hai loại sản phẩm lên men bằng kỹ thuật Western Blot 96
3.1.6.2. So sánh hàm lượng IL-2 sau lên men trên SDS-PAGE 97
3.1.7. Tinh chế IL-2 tái tổ hợp từ nguồn lên men dòng tế bào P. pastoris 100
3.1.7.1. Xử lý mẫu IL-2 thô tiền tinh chế (từ dòng tế bào P. pastoris) 100
3.1.7.2. Tinh chế IL-2 tái tổ hợp từ dòng tế bào P. pastoris lần 1 (FPLC) 104
3.1.7.3. Tinh chế IL-2 tái tổ hợp từ dòng tế bào P. pastoris lần 2 (HPLC) 105
3.1.8. Tinh chế IL-2 tái tổ hợp từ nguồn lên men dòng tế bào E. coli. 108
3.1.8.1. Xử lý mẫu IL-2 thô tiền tinh chế (từ dòng tế bào E. coli) 109
3.1.8.2. Tinh chế IL-2 tái tổ hợp (từ dòng tế bào E. coli) 112
3.1.9. So sánh hiệu quả tạo sản phẩm IL-2 tái tổ hợp từ hai hệ tế bào E. coli và P. pastoris 114
3.1.10. Tạo công thức sản phẩm IL-2 tái tổ hợp sau tinh chế 118
3.2. Sản xuất thử nghiệm sản phẩm IL-2 tái tổ hợp trong điều kiện chuẩn GMP 123
3.2.1. Tiêu chuẩn GMP cho sản xuất thử nghiệm 124
3.2.1.1. Con người 125
3.2.1.2. Hệ thống nhà xưởng 125
3.2.1.3. Quy định hướng (chiều) đi của quy trình, con người và nguyên vật liệu 128


3.3.2. Đánh giá thử nghiệm sản phẩm IL-2 tái tổ hợp trên động vật thực nghiệm 155
3.3.2.1. Kết quả hoạt hóa, nhân nuôi và duy trì các dòng tế bào ung thư 156
3.3.2.2. Kết quả gây u thực nghiệm cho động vật 158
3.3.2.3. Kết quả thử hoạt tính ức chế khối u của IL-2 VN và IL-2 TQ trên động vật mang khối u
thực nghiệm 161

3.4. Kiểm định sản phẩm IL-2 tái tổ hợp theo tiêu chuẩn cơ sở 166
3.4.1. Kiểm định trong nước 166
3.4.2. Kiểm định Quốc tế 167
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 169
4.1. Kết luận 169
4.2. Kiến nghị 170
DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 171
PHỤ LỤC 177
1. Trình tự nucleotide của gen il-2 người và trình tự dịch mã ra amino acid của IL-2 sử dụng trong quá
trình biểu hiện gen 177

2. So sánh trình tự DNA của gen il-2 trong vector tác dòng với gen il-2 lý thuyết 180
3. Các sơ đồ vector sử dụng trong Đề tài 182
4. Kết quả kiểm nghiệm trong nước với sản phẩm IL-2 tái tổ hợp của Đề tài 184
5. Kết quả kiểm nghiệm Quốc tế với sản phẩm IL-2 tái tổ hợp của Đề tài 185
6. Các sáng chế liên quan đến sản phẩm IL-2 tái tổ hợp của Đề tài 190
7. Kiểm tra trình tự amino acid của IL-2 tái tổ hợp 191
7.1. r-IBinleukin-2 (IL-2 tái tổ hợp của Đề tài) 191
7.1.1. Phổ khối các peptide r-IBinleukin-2 được phân tích trên hệ LC-ESI-ion TRAP 191
7.1.2. Nhận diện protein rBInleukin-2 195
7.2. IL-2 tái tổ hợp của Trung Quốc 198
7.2.1. Phổ khối các peptide của sản phẩm IL2 của Trung Quốc được phân tích trên hệ LC-ESI-ion
TRAP 198

dOT Dissolved oxygene tensions
E. coli Escherichia coli
EDTA Ethylen diamin tetra acid acetic
ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay
EPO Erythropoietin
FDA Food and Drug Administration
FPLC Fast Protein Liquid Chromatography
G-CSF Granulocyte-colony stimulating factor (yếu tố kích thích dòng bạch cầu
hạt)
GFs Growth factors (các nhân tố sinh trưởng)
GM-CSF Granulocyte-macrophage colony stimulating factor ( yếu tố kích thích
dòng bạch cầu hạt-đại thực bào)
GMP Good Manuafacturing Practice (điều kiện thực hành sản xuất tốt)
GR% Tỷ số phát triển khố
i u
HIV Human immunodeficiency virus
HPLC High Performance Liquid Chromatography
IARC The International Agenecy for Research on Cancer
IFN Interferon
IL-2 Interleukin-2
ILS Thời gian sống thêm
IPTG Isopropylthio-β-D-galactoside
IR% Tỷ số thoái lui
Kb Kilobase
kDa Kilo Dalton
LAK Lymphokine-activated killer (tế bào diệt hoạt hóa bởi lymphokine)
LB Luria and Bertani
LH1 Lysyl hydroxylase 1
LS Lysate
Báo cáo tổng hợp: Đề tài KC.04.21/06-10