46
Bảng 4.4 Kết quả phát hiện các gen độc lực cho một số khuẩn lạc E. coli riêng lẻ
phân lập được từ phân heo tiêu chảy
Mẫu Gen độc lực
Loại khuẩn lạc
khuẩn lạc được
chọn
stx1 stx2 eae hly lt sta stb vt2e
1HS
(Eae, hly)
1 - - - - - - - -
2 - - + - - - - -
3 - - - - - - - -
1TS
(Eae, hly)
2 - - - - - - - -
3 - - - - - - - -
4 - - - - - - - -
2HS
(stx1, hly)
4 - - - - - - - -
5 - - - - - - - -
6 - - - - - - - -
3HS
2 - - - - - - - -
(stb)
5 - - - - - - - -
3TS
(stb)
3 - - - - - - - -
47
4.4. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli phân lập được từ phân bê tiêu chảy
Bảng 4.5 Kết quả phát hiện các gen độc lực của từng nhóm khuẩn lạc đại diện
cho E. coli trong phân bê tiêu chảy
Mẫu Gen độc lực
Thứ tự
Loại khuẩn lạc
stx1 stx2 eae

hly lt sta stb vt2e
HM

TS HS
1
x - - - - - - - -
x - - - - - - - -
2
x - - - - - - - -
x - - - - - - -
3
x - - - - - - - -
x - - - - - - - -
4
x + - - - - - - -
x + - - - - - - -
5
x - - - - - - - -
x - - - - - - - -

(Smith và Scoland, 1998; Gyles, 1992).
- Các gen stx1, stx2, eae, hly được phát hiện, trong khi gen vt2e thì không được
phát hiện ở bất kì nhóm khuẩn lạc E. coli phân lập từ 10 mẫu phân bê tiêu chảy. Kết
quả này là hoàn toàn hợp lý vì gen vt2e chỉ được tìm thấy trong nhóm STEC ở heo
(Beutin và ctv, 1995). Theo Blanco và ctv (1997), gen vt2e là một biến chủng của gen
stx2, biến chủng này chỉ được phát hiện ở những dòng E. coli gây phù thủng trên heo.
Có 3 mẫu phát hiện được E. coli mang gen độc lực là mẫu 4, 6, 7.
 Ở mẫu phân 4 có 2 loại khuẩn lạc HS và HM. Cả hai loại khuẩn lạc này
đều mang gen stx1.
 Ở mẫu phân 6 có hai loại khuẩn lạc HS và HM. Cả hai loại khuẩn lạc
này đều mang gen stx1, eae, hly. Việc phát hiện nhiều gen độc lực trên
cùng một mẫu sẽ tăng nguy cơ gây bệnh. Độc tố Hly gây xuất huyết ruột
(Botteldoorn và ctv, 2003), gen hly có thể phát hiện cùng với gen stx1,
stx2, eae trong phân của những bệnh nhân HUS (Paton và Paton, 1998
a
).
 Ở mẫu phân 7 có 2 loại khuẩn lạc HS và HM. Cả hai loại khuẩn lạc này
đều mang gen stx1, stx2.
- Như vậy, trên cùng một mẫu phân bê tiêu chảy được phân lập trên 2 loại môi
trường SMAC, MAC đều cho kết quả phát hiện gen độc lực giống nhau. Điều này
chứng tỏ không có sự khác biệt về khả năng phát hiện gen độc lực giữa các loại khuẩn
lạc (Hồng trên MAC hoặc hồng trên SMAC).

49
* Tổng kết việc phát hiện gen độc lực của E. coli từ những mẫu phân tiêu chảy
trên, ta có những nhận xét sau:
- Khả năng phát hiện các gen độc lực của E. coli từ những mẫu phân tiêu chảy

Tỷ lệ (%)

0 0 0 0 0 0 0 0

Qua bảng 4.6, kết quả phát hiện các gen độc lực stx1, stx2, eae, hly, lt, sta, stb,
vt2e từ nhóm khuẩn lạc TC phân lập từ mẫu bề mặt thịt bò là âm tính. Kết quả này có
thể giải thích như sau:
- Có thể do số mẫu xét nghiệm ít.
- Do quy trình giết mổ đảm bảo vệ sinh.
- Do mẫu xét nghiệm âm tính thật sự vì bò lấy mẫu không mang dòng E. coli
gây độc.

50
4.6. Tổng kết kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli trên các mẫu khảo sát
Với 36 mẫu khảo sát gồm 8 mẫu phân bò tiêu chảy, 9 mẫu phân heo tiêu chảy,
10 mẫu phân bê tiêu chảy, và 9 mẫu bề mặt thịt bò, tổng kết kết quả phát hiện các gen
độc lực của E. coli trên các mẫu khảo sát được trình bày ở bảng 4.7 và biểu đồ 4.1
Bảng 4.7 Tổng kết kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli trên các mẫu
khảo sát
Mẫu N n
Gen độc lực
stx1 stx2

eae hly lt-I sta stb vt2e
Phân bò
tiêu chảy

8
(%)


0
0
1
11,11

2
22,22

5
55,56

0
0
6
66,67

3
33,33

Phân bê
tiêu chảy

10
(%)

3
30
3
30
1

0
0
0
0
0
0
Tổng
36 13 4 3 2 4 5 0 6 3
% 36,1 11,11

8,33

5,56 11,11

13,89

0 16,67

8,33

N: Số lượng mẫu khảo sát
n: Số lượng mẫu phát hiện E. coli có mang gen độc lực

51

Phần 5

KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

5.1. Kết luận
Từ những kết quả thu nhận được trong quá trình thực hiện đề tài, chúng tôi rút
ra những kết luận sau:
(5) E. coli trên môi trường thạch MAC chỉ xuất hiện 1 loại khuẩn lạc hồng (HM),
trên môi trường thạch SMAC xuất hiện 2 loại khuẩn lạc trắng (TS) và hồng
(HS), trên môi trường thạch CT-SMAC xuất hiện 1 loại khuẩn lạc trắng.
(6) Nhóm khuẩn lạc có mang gen độc lực thì chưa chắc từng khuẩn lạc riêng lẻ có
mang gen độc lực đó.
(7) Tần số phát hiện các gen độc lực của E. coli từ những mẫu phân tiêu chảy lần
lượt là: 25% trên phân bò tiêu chảy (stx2, hly), 30% trên phân bê tiêu chảy
(stx1, stx2, hly, eae), 88,89% trên phân heo tiêu chảy (stb, lt, vt2e, hly, stx1,
eae).
(8) Điều này chứng tỏ rằng trên cả 3 nhóm đối tượng trên, E. coli mang các gen
độc lực có thể là nguyên nhân quan trọng gây tiêu chảy.
(9) 9 mẫu bề mặt thịt bò chưa phát hiện được vi khuẩn E. coli mang gen độc lực
(10) Chưa phát hiện được gen sta trong E. coli phân lập từ 27 mẫu phân tiêu chảy
của bò, bê và heo.
5.2. Đề nghị
(1) Có thể ứng dụng kỹ thuật multiplex – PCR để phát hiện gen độc lực của những
dòng E. coli gây bệnh, góp phần chẩn đoán bệnh cho gia súc và người, kiểm tra
vệ sinh an toàn thực phẩm.
(2) Tăng số lượng mẫu khảo sát, định serotype bằng kháng huyết thanh chuẩn
(antisera).

producing Escherichia coli. J. Clin. Microbiol. 27:2559-2564.

7. Beutin L., Geier D., Steinruck S., Zimmermann S., and Scheutz F., 1993.
Prevalence and some properties of verotoxin (Shiga-like-toxin)-producing
Escherichia coli in seven different species of healthy domestic animals. J.
Clin. Microbiol. 31:2483-2488.

8. Beutin L., Aleksic S., Zimmermann S., and Scheutz F., 1994. Virulence
factors and phenotypic traits of verotoxigenic Escherichia coli isolated from
human patients in Germany. Med. Microbiol. Immunol. (Berlin) 183:13-21.

9. Beutin L., Geier D., Zimmermann S., and Karch H., 1995. Virulence markers
of Shiga like toxin producing Escherichia coli strains originating from
healthy domestic animals of different species. J. Clin. Microbiol. 33:631-635.

10. Black R. E., Merson H. M., Huq I., Aleim A. R. M., and Yunus N., 1981.
Incidence and severity of rotavius and Echerichia coli in rural Banglades.
Lancet I:141-143. 54
11. Blanco M., Blanco J. E., Gonzalez E. A., Mora A., Jansen W., Gomes T. A.
T., Zerbini L. F., Yano T., de Castro A. F. P., and Blanco J., 1997. Gene
coding for enterotoxins and Verotoxins in Porcine Escherichia coli strains
belonging to different O:K:H serotype: relationship with phenotype. J. Clin.
Microbiol. 35:2958-2963.

12. Botteldoorn N., Heydrick M., Rijpens N., Herman L., 2003. Detection and
characterization of verotoxigenic Escherichia coli by a VTEC/EHEC
multiplex – PCR in porcine faeces in pig carcass swabs. Res. Microbiol.

20. Cocolin L., Manzano M., Cantoni C., Comi G., 2000. A multiplex-PCR
method to detect enterohemorrhagic (EHEC) and enteropathogenic (EPEC)
Escherichia coli in arttificially contaminated foods. Int. J. Hyg. Environ.
Health. 203:159-164.

21. DesRosiers A., Fairbrother J. M., Johnson R. P., Desautels C., Letellier A.
Qeessy S., 2001. Phenotypic and genotypic characterization of Escherichia
coli verotoxin-producing isolates from humans and pigs. J. Food Protect.
64:1904-1911