BăGIÁOăDCăVẨăẨOăTO
TRNGăIăHCăMăTP.ăHăCHệăMINH
KHOAăCỌNGăNGHăSINHăHC

BÁO CÁO KHịAăLUN TTăNGHIP
Tên đ tài:
KHOăSÁTăHOTăTệNHăKHÁNGăKHUN,ă
KHÁNG NMăGỂYăBNHăCA VIăKHUNăNIă
SINH VÀ CAOăCHITăT CÂY NEEM
(Azadirachta indica A. Juss)

KHOAăCỌNGăNGHăSINHăHC
CHUYểNăNGẨNH:ăNỌNGăNGHIPăậ DC
GVHD: ThS.ăDngăNhtăLinh
SVTH: BùiăVnăThin
MSSV: 1053010721
Niên khóa: 2010 - 2014
Tp.ăHăChí Minh, tháng 5 nmă2014

Li cmăn
 hoàn thành đ tài này, em xin gi li cm n đn các quý thy, cô khoa Công Ngh
Sinh Hc, trng i hc M thành ph H Chí Minh đã ging dy và truyn đt kin
thc c bn đ giúp em làm c s cho đ tài nghiên cu.
Em xin gi lòng bit n chân thành và sâu sc đn cô Dng Nht Linh đã tn tình
hng dn, đng viên, truyn đt nhng kin thc và kinh nghim quý báu, to mi

E. coli Escherichia coli
MHA Muller Hinton agar
M. gypseum Microsporum gypseum
MIC Minimum Inhibitory Concetration ậ Nngăđ c ch ti thiu
NA Nutrient Agar
NB Nutrient Broth
NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standards
P. aeruginosa Pseudomonas aeruginosa
PDA Potato Dextrose Agar
S. aureus Staphylococcus aureus
SDA Sabouraud Dextrose Agar
SE Standard Error
S. typhi Salmonella typhi
TSA Trypticase Soy Agar
T. rubrum Trichophyton rubrum
T. mentagrophytes Trichophyton mentagrophytes
KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN ii
DANH MC HÌNH NH
Hình 1.1. Cu trúc ca các hp cht có hot tính sinh hc t cây neem 12
Hình 2.1. Kt qu kháng vi khun, vi nm bngăphngăphápăkhuch tán qua ging
thch 39
Hình 2.2. Th nghim MIC ca cao chit trong thch 41
Hìnhă3.1.ăcăđim cây neem (Azadirachta indica A. Juss) 53
Hình 3.2. Hình nhăquanăsátăđi th vi khun ni sinh t cây neem 56
Hình 3.3. Kt qu quan sát vi th chng KT1 phân lpăđc t cây neem 57
Hình 3.4. Kh nngăkhángăkhun ca cao chit t lá neem 60
Hình 3.5. Kh nngăkhángăkhun ca cao chit t v thân neem 63
Hình 3.6. Kh nngăkhángăkhun S. typhi ca các chng ni sinh t cây neem 64
Hình 3.7. Kh nngăkhángănm ca cao chit t lá neem 67

Bng 3.13. Kt qu đnh danh sinh hóa chng ni sinh KT2 79 KHÓA LUN TT NGHIP DANH MC
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN iv
DANH MCăSă
Săđ 2.1. Quy trình thí nghim 32
Săđ 2.2. Quy trình chun b và chit xutăcaoădc liu 35
DANH MC BIUă
Biuăđ 3.1. nhăhng caădungămôiăđn khiălng cao chităthuăđc t lá và v
thân neem 54
Biuăđ 3.2. So sánh kt qu kháng khun ca các loi cao chit t lá neem 59
Biuăđ 3.3. So sánh kt qu kháng khun ca các loi cao chit t v thân neem 62
Biuăđ 3.4. So sánh kt qu kháng nm ca các loi cao chit t lá neem 66
Biuăđ 3.5. So sánh kt qu kháng nm ca các loi cao chit t v thân neem 69

KHÓA LUN TT NGHIP MC LC
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN v
MC LC
DANH MC CÁC T VIT TT i
DANH MC HÌNH NH ii
DANH MC BNG iii
DANH MCăSă iii
DANH MC BIUă iv
MC LC v
T VNă 1
PHN I: TNG QUAN TÀI LIU 3
1.1. TNG QUAN V NGUYÊN LIU 4
1.1.1. Gii thiu chung v cây neem (Azadirachta indica A. Juss) 4
1.1.2. Thành phn hóa hc và các cht có hot tính t cây neem 8

2.2.3. Quy trình thu nhn và x lý mu 33
2.2.4. Quy trình chit xutăcaoădc liu và phân lp vi khun ni sinh t cây
neem 34
2.2.5. nh tính kh nngăkhángănm, kháng khun gây bnh 37
2.2.6. Xácăđnh nngăđ c ch ti thiu (MIC) ca cao chit vi vi khun và
vi nm gây bnh 40
2.2.7. nh danh vi khun ni sinh bng test sinh hóa 43
PHN III: KT QU VÀ THO LUN 51
3.1. KT QU GIÁMăNH TÊN KHOA HC CA CÂY 52
3.2. KT QU CHITăCAOăDC LIU VÀ PHÂN LP VI KHUN NI
SINH T CÂY NEEM 53
3.2.1. Kt qu kho sát nhă hng ca dung môi chită đn khiă lng cao
chităthuăđc t lá và v thân cây neem 53
3.2.2. Kt qu phân lp vi khun ni sinh t cây neem 55
KHÓA LUN TT NGHIP MC LC
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN vii
3.3. KT QU NH TÍNH KH NNGăKHÁNGăNM, KHÁNG KHUN 58
3.3.1. Kt qu đnh tính kh nngăkhángăviăkhun gây bnh 58
3.3.2. Kt qu đnh tính kh nngăkháng vi nm gây bnh 64
3.4. KT QU XÁCă NH NNGă  C CH TI THIU (MIC) CA
CAO CHIT 73
3.5. KT QU NH DANH SINH HÓA CHNG VI KHUN NI SINH 79
Phn IV: KT LUNăVẨă NGH 80
4.1. KT LUN 81
4.2. KIN NGH 83
TÀI LIU THAM KHO 84
PH LC 90 KHÓA LUN TT NGHIP T VNă

dichloromethaneăđu cho thy hot tính kháng 10 chng vi khun gây bnh.ăNmă2012,ă
Hashmat và cng s đƣăkho sát cao chit cây neem bng methanol có kh nngăc ch
Bacillus subtilis viăđngăkínhăkhángă28ămm.ăNmă2013,ăAkpuakaăvƠăcs. đƣănghiênă
cu cao chit lá neem bng n-hexan c ch Salmonella typhi và Candida albicans vi
đng kính c ch 17 mm và 28 mm. Nmă2009, Verma vƠăcs.ăđƣăphơnălpăđc 55
chng x khun ni sinh t cây neem có kh nngăc ch đc 54,4 % hotăđng ca
vi khun và nm bnh.
Tuyăđƣăđc s dng trong dân gian t rtălơuănhngăhinănayătrongănc các
nghiên cu, bài báo khoa hc v cây neem rt ít. Vì vy, nhm phát huy và phát trin
ngun nguyên liu snăcóătrongănc, kt hp gia y hc c truyn và y hc hinăđi,
chúng tôi thc hinăđ tài: ắKho sát hot tính kháng vi khun, vi nm gây bnh
ca vi khun ni sinh và cao chit t cây neem (Azadirachta indica A.ăJuss)”.
 Mc tiêu:
Nghiên cu hot tính kháng vi khun, vi nm gây bnh ca vi khun ni sinh và
cao chit t cây neem (Azadirachta indica A. Juss).
 Ni dung thc hin bao gm:
Chit xutăđcăcaoădc liu t lá và v thân cây neem.
Th nghim hot tính kháng khun, kháng nm gây bnh t cao chit lá và v
thân neem.
Xácăđnh nngăđ c ch ti thiu caăcaoădc liu t lá và v thân neem vi vi
khun, vi nm gây bnh.
Phân lp và kho sát hot tính kháng khun, kháng nm ca vi khun ni sinh t
cây neem.

KHÓA LUN TT NGHIP TNG QUAN TÀI LIU
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 3

PHN I:
TNG QUAN TÀI LIU


SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 5
mc  Sri Lanka, Thái Lan, Nam Malaysia Ngoài ra nó còn đc tìm thy 
Phillipines:  đoăFiji,ăđo Mauritius và tri rng tiăcácăđo khác  nam Thái Bình
Dng.ă Trungăôngănóăđc tìm thy  YeMen và Saudi Arabia. Ti Châu Phi cây
neem tn ti  Ghana,ăNigieria,ăSudanăvƠăcácăncăôngăPhi.ă Châu M nóăđc tìm
thy  cácăđo vùng Caribe và vùng Trung M (Schmutterer, 1990).
Cây neemăđc di thc vào VităNamănmă1981ădoăgiáoăsăLơmăCôngănh, nhà
lâm hc Vit Nam, nhân dp tham d hi tho lâm nghip quc t v “Vaiătròăca rng
trong s phát trin cngăđngănôngăthôn”ătiăSenegalăChơuăPhi.ăỌngăđƣăđemăht ging
cây neem v trng ti Phan Thit,ăsauăđóătrng rng ra  Ninh Thun, Bình Thun. Ông
lƠăngiăđt tên cho loài cây này là xoan chu hnăđ phân bit viăxoanăđaăphngă
(Melia azadirachta)ăđc trng ph bin ti Vit Nam (LơmăCôngănh, 1991).
Cây neem thích hp  nhng vùng nhităđi và cn nhităđi.ăc bit cây sinh
trng tt  nhngăvùngăđt xu,ăkhôănóng,ăđ cao khong 1000 m, tính t mcănc
bin, vùng gnăxíchăđo. R cái mc sâu, có th dài gp hai ln chiu cao ca cây (Lâm
Côngănh, 1991).
1.1.1.3. c đim hình thái
Neem là cây thân g xanhăquanhănm,ăcaoătrungăbìnhăt 13ăđn 20 m,  điu kin
thích hp có th cao ti 40 m, chu hn tt.
Nhánh cây rng,ătánăláăcóăđng kính khong 15 ậ 20 m.
Thân cây thng, v cngăvƠătngăđi dày, xù xì, có nhiu rnh nt, màu xám bên
ngoƠiăvƠămƠuăđ nht bên trong.
Lá 1 lnăkép,ăhìnhălôngăchim,ăbìaăláăcóărngăca,ădƠiăkhong 20 ậ 40 cm, cung lá
ngn. Lá non và n có v đng, hu ngt.
Hoaălng tính, màu trng, dài khong 5 ậ 6 mm, rng khong 8 ậ 11 mm, dài có
lông,ăcóămùiăthm.ăHoaămc thành tng cm, mi cm có khong 150 ậ 250 hoa.
Trái hình bu dc, màu oliu, v mng, thtăđng màu vàng nht, dày khong 0,3 ậ
0,5 cm, dài khong 2 cm.
KHÓA LUN TT NGHIP TNG QUAN TÀI LIU
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 6

Bng 1.1. Mt s công dngădc liu trong các b phn ca cây neem
B phn cây neem
Công dng
Lá
Tr phong, vnăđ v mt, chy máu cam, dit sâu b,
chánăn, loét da
V cây
Gimăđau,ăcha st
Hoa
c ch s tit mt, loi b đm, dit sâu b
Qu
Cha bnhătr,ăgiunătrongărut, ri lonăđng tit niu,
chyămáuăcam,ătiêuăđƠm,ăbnh tiuăđng, vtăthngă
và bnh phong.
Cành cây
Làm gim ho, hen suyn, bnh tr,ăkhi u, giun trong
rut, tiuăđng.
Cht keo
Cha hiu qu bnhăngoƠiădaănhăvy nn, các vt
thngăvƠăvt loét.
Bt ht neem
Cha phong và giun trong rut.
Tinh du
Cha phong và giun trong rut.
Hn hp r, v, lá,
hoa và trái
Bnh v máu, ri lon mt, nga, loét da, bng và bnh
phong
1.1.1.5. Dc tính
Hp chtănimbidolăđc trích t ht neem có tính h st và tr stărétă(Phanăc

nhiuăloƠiăthiênăđch và tác nhân th phn trong t nhiên.ăơyălƠăcăs cho vic ng
dng các dch chit t cơyăneemăđ sn xut thuc tr sơuăvƠădc phm (Biwas và cs.,
2002).
1.1.2. Thành phn hóa hc và các cht có hot tính t cây neem
Nhng nghiên cu v thành phn hóa hc trên các sn phm t cơyăneemăđc
tin hành rng rãi  gia th k XX. K t báo cáo ca Siddiqui và cng s vƠoănmă
KHÓA LUN TT NGHIP TNG QUAN TÀI LIU
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 9
1992 v s cô lp nimbin, hp chtăđngăđuătiênăđc tách ra t duăneem,ăhnă135ă
hp cht có hot tính sinh hcăđƣăđc cô lp t các b phn khác nhau ca cây neem.
Các hp chtăđƣăđc chia thành hai loi chính: isoprenoids và hp cht khác.
Các isoprenoids bao gm diterpenoids và triterpenoids cha protomeliacins,
limonoids, azadirone và các dn xut ca nó, gedunin và dn xut, các hp cht loi
vilasinin và csecomeliacinsănhănimbin, salanin và azadirachtin.
Các nonisoprenoids bao gm protein (amino acid), carbonhydrate
(polysaccharides) và các hp cht chaăluăhunh,ăpolyphenolicănhăflavonoidă(rutin,ă
quercetin, kaempferol, quercitrin, myricetin, ), glycosides, dihydrochalcone, coumarin
và tanin, hp cht béo,
Các cht hóa hcăđc tìm thy nhiuă trongă cơyă neemă vƠăđc công nhn tác
dngădcălỦăkhácănhauăđc lit kê trong bng 1.2
và trong hình 1.1 (Drabu và cs.,
2012; Biswas và cs., 2002).
Bng 1.2. Mt s hp cht có trong cây neem và tác dngădc lý ca chúng
Hp cht
Ngun
Tác dngădc lý
Nimbidin
Tinh du
ht, v cây,
lá cây

Ht
Tr st rét
Mahmoodin (5)
Tinh du
ht
Kháng khun
Gallic acid (6), epicatechin
(7) và catechin (8)
V cây
ChngăviêmăvƠăđiu hòa min dch
Margolone (9),
margolonone (10) và
isomargolonone (11)
V cây
Kháng khun
Cyclic trisulphide (12) và
cyclic tetrasulphide (13)
Lá cây
Kháng nm
Polysaccharides

Chng viêm
Polysaccharides GIa (14),
Gib
V cây
Chngăungăth,ăkhángăkhi u
Polysaccharides GIIa (15),
GIIIa (16)
V cây
Chng viêm

SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 13
Vi sinh vt niăsinhăđƣănhnăđc s chú Ủăđángăk sau khi phát hinăđc chúng
có kh nngăbo v thc vt chng li côn trùng, sâu bnh, mm bnh và thm chí c
đng vtănăthc vt. Huănhătt c các loài thc vt (khong 400.000) cha mt hoc
nhiu vi sinh vt ni sinh (Khan, 2007). Chúng sinh sng  phn ln các cây khe
mnh, trong các mô khác nhau, ht, r, thân, cành và lá. Thc vt ký ch đemăli li
ích rng rãi bngăcáchănuôiădng nhng vi sinh vt ni sinh này, và các vi sinh vt ni
sinhănƠyăgiúpăthúcăđyătngătrng,ănơngăcaoăđ kháng các tác nhân gây bnh khác
nhau bng cách sn xut kháng sinh cho thc vt ký ch. Vi sinh vt niăsinhăcngăsn
xut các cht chuyn hóa th cp có tm quan trng trong y hc hinăđi, nông nghip
và công nghip.ăNgi ta cho rng hotăđng h sinh ca thc vt có s hin din ca
vi sinh vt niăsinhănhămt cht "kích hot sinh hc" đ kích hot các h thng phn
ng mtă cáchă nhanhă hnă vƠă mnh m hnă soă vi thc vtă khôngă đc h sinh
(Bandara và cs, 2006; Strobel và Daisy, 2003).
1.2. TNG QUAN V MT S VI KHUN GÂY BNH TRÊN
NGI
1.2.1. Staphylococcus aureus
Phân loiănhăsau:
Gii: Prokaryote
Phân ngành: Firmicute
Lp: Firmibacteria
H: Micrococceae
Chi : Staphylococcus
Loài: Staphylococcus aureus (Buchanan và Gibbons, 1994).
S. aureus là vi khunăGramădng,ă hìnhăcuăđng kính 0,5 ậ 1,5 µm, có th
đng riêng l, tngăđôi,ătng chui ngn, hoc tngăchùmăkhôngăđu gingănhăchùmă
nho.ăơyălƠăloi vi khunăkhôngădiăđng và không sinh bào t,ăthngăcătrúătrênădaăvƠă
KHÓA LUN TT NGHIP TNG QUAN TÀI LIU
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 14
màng nhy caăngi và đng vtămáuănóng.ăTrênămôiătrng Baird Parker, khun lc

o
C.ăTrongăđiu kin thích hp E. coli phát trin rt nhanh, thi
gian th h ch khongă20ăđn 30 phút.
E. coli là vi khunăthng trú  đng tiêu hóa caăngi, có th đc tìm thy 
đng hô hpătrênăhayăđng sinh dc. E. coli đngăđu trong các vi khun gây bnh
tiêu chy,ăviêmăđng tit niu,ăviêmăđng mt,ăcnănguyênăgơyănhim khun huyt.
E. coli có kh nngă gơyă bnh khi xâm nhp vào nhng v tríă trongă că th mà bình
thng chúng không hin din.
E. coli hiăsinhăcóătrongăphơnăngi khe mnh ch gây bnh khi có d vt hay h
thng min dch ca ký ch b suy yu.
E. coli gây bnhăđng rut. Tác nhân gây bnhăquaăđng tiêu hóa bt c khi
nào ký ch nutăvƠoăđ s lng vi khun. Truyn bnh ch yu qua thcănăhayănc
ung b nhim vi khun hay truyn t ngiă nƠyă quaă ngi khác. (Buchanan và
Gibbons, 1994).
1.2.3. Salmonella typhi
Phân loi nhăsau:
Phân ngành: Proteobacteria
Lp: Gamma Proteobacteria
B: Enterobacteriales
H: Enterobacteriaceae
Chi: Salmonella
Loài: Salmonella typhi (Buchanan và Gibbons, 1994).
S. typhi là trc khun Gram âm, có lông xung quanh thân. Vì vy có kh nngădiă
đng,ăkhôngăsinhănhaăbƠo.ăKíchăthc khong 0,4 - 0,6 x 2 - 3ăm.ăS. typhi là vi khun
hiu khí tùy nghi, phát trinăđcătrênăcácămôiătrng nuôi cyăthôngăthng. Trong
môiătrng thích hp sau 24 gi khun lcăcóăkíchăthc trung bình 2 ậ 4 mm.
Kh nngăgơyăbnh ca S. typhi:
KHÓA LUN TT NGHIP TNG QUAN TÀI LIU
SVTH:ăBỐIăVNăTHIN 16
S. typhi ch gây bnhăchoăngi, ch yu gây bnhăthngăhƠn.