`

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM
----------------------------------

PHẠM THỊ OANH

ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG HẠT VÀ NGHIÊN CỨU
ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC GEN LTP Ở ĐẬU XANH
(Vigna radiata (L.) Wilczek)

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

THÁI NGUYÊN - 2010

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên




ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN
TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM
----------------------------------

PHẠM THỊ OANH

ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG HẠT VÀ NGHIÊN CỨU
ĐẶC ĐIỂM CẤU TRÚC GEN LTP Ở ĐẬU XANH
(Vigna radiata (L.) Wilczek)


kiện giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này.
Tôi xin chân thành cảm ơn cô Nguyễn Bích Nga - Phòng Miễn dịch học Viện Công nghệ Sinh học đã hết lòng giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này.
Tôi cũng xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của các kỹ thuật viên phòng
thí nghiệm Di truyền, Sinh học hiện đại - Khoa Sinh - Kỹ thuật Nông nghiệp Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên và Bộ môn Sinh học phân tử,
Công nghệ gen - Viện Khoa học Sự sống - Đại học Thái Nguyên.
Qua đây, tôi cũng xin cảm ơn Bộ môn Hệ thống canh tác - Viện Nghiên
cứu Ngô đã cung cấp một số giống đậu xanh giúp tôi có thể thực hiện luận văn.
Cuối cùng, tôi xin được bày tỏ lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè đã nhiệt tình
ủng hộ và động viên tôi trong suốt quá trình thực hiện luận văn.
Tác giả luận văn

Phạm Thị Oanh

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên




DANH MỤC NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN
ABA

Abscisic Acid (Axit abxisic)

bp

Base pair (cặp base)

CTAB

Cetyltrimethyl-ammonium bromide

LEA

Late embryogenesis abundant protein (Protein tích lũy với số
lượng lớn ở giai đoạn cuối của quá trình hình thành phôi)

LTP

Lipid Transfer Protein (Protein vận chuyển lipit)

MGPT

Molecular chaperone (Môi giới phân tử)

NXB

Nhà xuất bản

PCR

Polymease Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp)

PLC

Phospholipase C

RNA

Ribonucleic acid (Axit Ribonucleic)

TAE

Các giống đậu xanh nghiên cứu

24

2.2

Xây dựng đường chuẩn định lượng protein theo Lowry

28

2.3

Trình tự cặp mồi nhân gen LTP

31

2.4

Thành phần phản ứng PCR

31

2.5

Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR

32

2.6



Khả năng chịu hạn ở giai đoạn cây non của các giống đậu xanh
nghiên cứu
Phổ hấp thụ DNA ở bước sóng 260nm và 280nm của giống
đậu xanh 044/ĐX06 và HN 2
Vị trí sai khác trong trình tự nucleotide của gen LTP ở giống
đậu xanh 044/ĐX06, HN 2
Vị trí sai khác trong trình tự nucleotide của gen LTP ở giống
đậu xanh 044/ĐX06, HN 2 và AY300807
Vị trí sai khác về trình tự amino acid trong protein của gen
LTP ở giống đậu xanh 044/ĐX06, HN 2
Vị trí sai khác về trình tự amino acid trong protein của gen
LTP ở giống đậu xanh 044/ĐX06, HN 2 và AY300807

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên

43

46

52
54
55
56




DANH MỤC CÁC HÌNH TRONG LUẬN VĂN
Hình


42
43

Mối tương quan giữa chỉ số chịu hạn và chiều dài rễ của các
giống đậu xanh nghiên cứu

44

3.4

Hình ảnh của 4 giống đậu xanh nghiên cứu sau 11 ngày gây hạn

45

3.5

DNA tổng số của giống đậu xanh 044/ĐX06 và BG 3

46

3.6

Hình ảnh điện di kết quả nhân gen LTP

47

3.7

Kết quả điện di DNA thu được từ kỹ thuật thôi gel

So sánh trình tự amino acid trong protein của gen LTP ở
giống đậu xanh 044/ĐX06, HN 2 và AY300807

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên

50
51
53

55

56




MỞ ĐẦU
1. Lý do chọn đề tài
Đậu xanh (Vigna radiata L.Wilczek) là một trong ba cây đậu đỗ chính
trong nhóm các cây đậu ăn hạt. Đây cũng là cây trồng có vị trí quan trọng
trong nền nông nghiệp của nhiều nƣớc, trong đó có Việt Nam [7], [11].
Trồng đậu xanh không những cung cấp nguồn thực phẩm giàu đạm,
đáp ứng nhu cầu về dinh dƣỡng của con ngƣời và vật nuôi mà còn có tác dụng
cải tạo và bồi dƣỡng đất, do rễ cây đậu xanh có các nốt sần chứa vi sinh vật cố
định đạm sống cộng sinh [4], [5].
Hiện nay, các giống đậu xanh trồng ở Việt Nam chủ yếu là các giống có
khả năng chịu hạn kém và thƣờng bị nhiễm một số bệnh nhƣ: sâu keo, sâu xanh…
Trong những năm gần đây, có một số công trình nghiên cứu về đậu
xanh đã tiếp cận phân tích các đại phân tử protein và DNA nhƣ: nghiên cứu
tính đa hình protein của các giống đậu xanh địa phƣơng bằng kỹ thuật phân

- Phân tích một số đặc điểm hình thái nhƣ: màu gốc thân mầm, màu vỏ
hạt, hình dạng hạt, khối lƣợng 1000 hạt, chiều dài thân và rễ của các
giống đậu xanh thu thập đƣợc ở giai đoạn cây non.
- Phân tích các chỉ tiêu hoá sinh sau: hàm lƣợng lipid, protein tan tổng số
của các giống đậu xanh thu thập đƣợc.
- Đánh giá khả năng chịu hạn của các giống đậu xanh thu thập đƣợc ở
giai đoạn cây non.
- Tách chiết DNA tổng số của 1 số giống đậu xanh.
- Nhân gen LTP bằng kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction).
- Tách dòng gen LTP của giống đậu xanh chịu hạn tốt và chịu hạn kém nhất.
- Xác định trình tự gen LTP.
- Phân tích cấu trúc gen LTP.
4. Ý nghĩa khoa học
Là cơ sở cho việc thiết kết vector chuyển gen nhằm tạo cây đậu xanh
mang gen LTP.

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên

2




CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. SƠ LƢỢC VỀ CÂY ĐẬU XANH
1.1.1. Nguồn gốc và phân loại cây đậu xanh
Nguồn gốc: Đậu xanh (Vigna radiata L. Wilczek), có bộ NST 2n = 22,
là loại cây đậu ăn hạt, thân thảo. Theo Vavilov, đậu xanh có nguồn gốc từ Ấn
Độ, đƣợc phân bố rộng rãi ở các vùng nhiệt đới trong đó chủ yếu là ở các
nƣớc Đông và Nam Á. Dạng dại của V. radiata cũng đƣợc tìm thấy ở


data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....



data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....