BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO

VIỆN KHOA HỌC
CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT
…………..o0o…………..

TRẦN QUANG MINH

NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP ĐỘT BIẾN NHẰM
TĂNG CƯỜNG KHẢ NĂNG ĐỐI KHÁNG BỆNH HÉO XANH CÀ
CHUA DO VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM CỦA MỘT
SỐ CHỦNG VI KHUẨN ĐỐI KHÁNG

LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC

Hà Nội – 2010
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên




BỘ GIÁO DỤC ĐÀO TẠO

VIỆN KHOA HỌC
CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT
…………..o0o…………..


Hà Nội, ngày 28 tháng 12 năm 2010
Học viên
Trần Quang Minh

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên




BẢNG KÝ HIỆU VIẾT TẮT

ADN

Axít deoxyribonucleic

AO

Acridine da cam

ARN

Axít ribonucleic

Bp

Base pair (cặp bazơ)

rARN

ARN riboxom


Phốt pho tổng số

VSV

Vi sinh vật

VSVĐK

Vi sinh vật đối kháng

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên




MỤC LỤC BẢNG

Tên bảng

Trang

Bảng 1.

Đặc tính sinh lý sinh hoá chính của vi khuẩn R.solanacearum

8

Bảng 2.



Bảng 7.

Kết quả định danh các chủng vi khuẩn đối kháng

49

bằng chương trình NCBI BLAST
Bảng 8.

Kích thước vòng đối kháng của các thể đột biến của chủng

50

DM ở nồng độ xử lý AO 24 µl/ml
Bảng 9.

Kích thước vòng đối kháng của các thể đột biến của chủng

51

DM ở nồng độ xử lý AO 30 µl/ml
Bảng 10. Kích thước vòng đối kháng của các thể đột biến chủng BK

53

ở nồng độ xử lý AO 24µl/ml
Bảng 11. Kích thước vòng đối kháng của các thể đột biến chủng

54


hoạt tính sinh học của hai thể đột biến
Bảng 18: Ảnh hưởng độ pH môi trường lên men đến mật độ và hoạt

67

tính sinh học của hai thể đột biến
Bảng 19. Mật độ vi khuẩn đột biến trên nền chất mang khác nhau

67

sau 6 tháng lưu giữ bảo quản
Bảng 20. Thành phần lý hóa của than bùn

69

Bảng 21. Thành phần lý hóa của bột bã mía

69

Bảng 22. Kích thước vòng đối kháng của các thể đột biến trong chế

71

phẩm
Bảng 23. Một số tính chất hóa học và sinh học đất thí nghiệm

73

(Mê Linh- Hà Nội)

cắt dọc đoạn thân cây cà chua
Hình 3. Một số hình thái khuẩn lạc đại diện cho vi khuẩn

41

gây bệnh héo xanh cà chua
Hình 4. Sản phẩm PCR của các chủng vi khuẩn gây bệnh trên cà

43

chua
Hình 5. Hoạt tính đối kháng của một số chủng vi khuẩn

46

Hình 6. Hoạt tính đối kháng của một số thể đột biến

52

Hình 7. Khả năng phòng trừ bệnh héo xanh của một số thể đột biến

56

trong điều kiện nhà lưới
Hình 8. Hình ảnh chuột sau 4 tuần thí nghiệm

60

Hình 9. Hoạt tính đối kháng của các thể đột biến trong chế phẩm sau


khuẩn R.solanacearum
1.6.1. Nhiệt độ không khí
1.6.2. Nhiệt độ đất
1.6.3. Cường độ chiếu sáng
1.6.4. Độ ẩm của đất
1.6.5. Ảnh hưởng của các loại đất
1.7. Biện pháp phòng trừ
1.7.1. Biện pháp hóa học
1.7.2. Biện pháp sinh học
1.8. Phòng trừ bệnh hại cây trồng bằng phương pháp sinh học
1.8.1. Khái niệm
1.8.2. Lựa chọn tác nhân phòng trừ sinh học
1.8.3. Sử dụng tác nhân vi sinh vật trong phòng bệnh hại thực vật
1.9. Nghiên cứu đột biến
1.9.1. Khái niệm đột biến
1.9.2. Gây đột biến nhân tạo bằng tác nhân vật lý
1.9.3. Gây đột biến nhân tạo bằng tác nhân hoá học
1.10. Phương pháp phát hiện đột biến
1.10.1. Phương pháp đề kháng
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên i

Trang
1
1
2
2
3
3
4
4

1.10.2. Phương pháp làm giàu chậm
1.10.3. Phương pháp làm giàu hạn chế
1.10.4. Phương pháp làm giàu nhờ penicilline
1.10.5. Phương pháp lọc
1.10.6. Trong phương pháp in
1.11. Mục đích tạo ra các thể đột biến
1.12. Ảnh hưởng của liều lượng và cường độ các chất gây đột biến
1.13. Thành tựu chọn tạo giống vi sinh vật bằng phương pháp đột biến
1.13.1. Một số thành tựu chọn tạo giống vi sinh vật bằng phương
pháp đột biến trên thế giới và ở Việt Nam
II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Vật liệu
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Phân lập và tuyển chọn chủng Ralstonia solanacearum gây
bệnh héo xanh cà chua
2.2.1.1. Thu mẫu và phân lập vi khuẩn gây bệnh
2.2.1.2. Đánh giá tính độc của R. solanacearum
2.2.1.3. Nhận dạng vi khuẩn R. solanacearum bằng kỹ thuật PCR
2.2.2. Phương pháp phân lập và tuyển chọn các chủng vi sinh vật đối
kháng
2.2.3. Nghiên cứu các đặc điểm sinh học và phân loại các chủng vi
khuẩn đối kháng
2.2.3.1. Xác định đặc tính sinh lý, sinh hóa
2.2.3.2. Phân loại vi sinh vật đối kháng bằng phương pháp tự gen
phần tử 16S rARN
2.2.4. Phương pháp xử lý đột biến
2.2.5. Phương pháp đánh giá khả năng phòng chống bệnh héo xanh
cà chua của chế phẩm vi sinh vật trong điều kiện nhà lưới quy mô
nhỏ
2.2.6. Đánh giá tính an toàn của các chủng vi sinh vật đối kháng

32
32
34
35
36

37
37
38
39
39
39
42
42
43




3.2.1. Thu mẫu, phân lập vi khuẩn đối kháng
3.2.2. Đánh giá hoạt lực đối kháng của các chủng vi khuẩn
3.3. Nghiên cứu các hoạt tính sinh học và phân loại các chủng vi sinh
vật đối kháng
3.3.1. Nghiên cứu các hoạt tính sinh học
3.3.2. Phân loại vi sinh vật đối kháng bằng phương pháp giải trình tự
gen phần tử 16S rARN
3.4. Xử lý đột biến và tuyển chọn các chủng vi khuẩn có hoạt tính đối
kháng cao nhất với vi khuẩn R. Solanacearum gây bệnh héo xanh
bằng phương pháp đột biến
3.4.1. Xử lý đột biến và tuyển chọn các thể đột biến

47
48
50

50
55
58
61
61
61
62
64
64
65
69
70
71
72
77
77
78
79
79
82




data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....

data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....

data error !!! can't not
read....


data error !!! can't not
read....

data error !!! can't not
read....