TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM
TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG
KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG
INSULIN
INSULIN
Công NGhệ vi sinh
Sản xuất protein tái tổ hợp trên E.coli
Nhóm:
1.Trần Thị Huyền Trân 61003158
2.Huỳnh Thị Trúc 61003267
3.Lê Thị Thúy Quyên 61003118
4.Nguyễn Thị Kim Thao 61003132
5.Huỳnh Thị Thanh Trúc 61003268
6.Phan Mỹ Hoàng Mai 61003080
7.Trần Nguyễn Hương Trang 61003262
I/ Bệnh tiểu đường:
II/ Một số loại insulin trên thị trường:
Loại insulin Màu sắc Nguồn gốc
Thời gian bắt đầu tác dụng
Thời gian hết tác dụng
Tác dụng nhanh
- Insulin Actrapid HM
- Insulinum maxirapidTrong Người
Lợn

30 phút (tiêm dưới da) 8h
Tác dụng bán chậm
- Insulatard HM

383
N
65
O
77
S
6.
Trọng lượng phân tử: 5808
2. Vai trò của insulin:
2. Vai trò của insulin:

Insulin làm tăng tính hấp thụ của các acid amin.

Thúc đẩy sự sinh tổng hợp các acid béo trong gan

Insulin làm tăng tính thấm của các ion kali, magie và phosphate vô cơ tạo
điều kiện cho quá trình phosphoryl hóa và sử dụng glucose.
IV/ Công nghệ sản xuất insulin:
Năm 1922, Fred Banting và
Charles Best thuộc Đại học
tổng hợp Toronto (Canada)
thông báo họ đã tìm ra insulin
và ứng dụng chất này trong
điều trị bệnh tiểu đường ở
người.
Nhược điểm:
+Insulin từ động vật có cấu trúc không hoàn toàn giống insulin người.
+ Hoạt động chức năng trong cơ thể kém hơn insulin người.
+ Khả năng hấp thụ kém.
+ Có thể gây ra các phản ứng miễn dịch trong cơ thể.

Gen: T7 RNAP
Promoter lacUV5
Plasmid T2
Gen mã hóa cho proinsulin người PCR
(5 DNA overlapping, mỗi đoạn 65 – 68 base như mẫu)
Cắt bằng BamHI và HindIII
Chèn vào pT2
pT2-hPI
Plasmid pT2-
hPI
Plasmid pT2M2PI:
Gen mã hóa M2PI đem PCR
(gen proinsulin người làm mẫu DNA)
Cắt bằng BamHI và HindIII
Chèn vào pT2
pT2M2PI
Plasmid pT2M2PI:

Bước 3: Biến nạp plasmid tái tổ hợp vào E.coli nhờ phương pháp trộn với dung dịch ion Ca hoặc tạo lỗ xung điện. Sau
quá trình biến nạp cần chọn lọc những dòng vi khuẩn mang gen mong muốn.
Bước 4: Các vi khuẩn chuyển gen sau đó
được đưa vào lên men.
Nuôi chúng trong nồi lên men sử dụng
phương pháp nuôi cấy liên tục, các chất
dinh dưỡng được bổ sung thường xuyên
để đảm bảo sự tăng trưởng của vi khuẩn
theo hàm số mũ. Sau 20 phút có hàng
triệu vi khuẩn được nhân lên qua nguyên
phân. Chỉ sau 1 thời gian ngắn, sinh khối
tăng lên rất nhanh và gen insulin được

(bằng 2 lượng mini proinsulin) (18h, 4
o
C)
↓
+ H
3
PO
4
đến pH 2.5  Dừng phản ứng
↓
Tinh sạch
(Reverse-phase HPLC)
` ↓
So sánh peak với mini proinsulin xoắn cuộn với
insulin

Phản ứng xoắn cuộn