 Môi trƣờng Clark lubs
Thành phần
g/l
Pepton bột
7 g
Glucose
5 g
KH
2
PO
4

5 g
Nước cất
1000 ml
pH
6,7 – 7,1

 Môi trƣờng lên men các loại đƣờng
Thành phần
g/l
Cao thịt
5 g
Pepton bột
10 g
Đường
10 g
Phenol red
0,01 g

PO
4

1 g
Agar
18 g
pH
6,9 ± 0,2
 Môi trƣờng khử Nitrate
Thành phần
g/l
Cao thịt
3 g
Pepton bột
5 g
NaNO
3

1 g
Agar
7 g
Nước cất
1000 ml
pH
7,0 ± 0,2

 Môi trƣờng Lòng đỏ trứng

0
C để dùng.
 Môi trƣờng Rỉ đƣờng + 2% Tinh bột
Thành phần
g/l
KH
2
PO
4

20 g
K
2
HPO
4

20 g
MgSO
4

0,5 g
(NH)
4
SO
4

40 g

NaCl 9 g
Nước cất 1000 ml
Dung dịch Iod 0,02N Cân 2 g KI hòa tan trong 3 ml nước cất, lắc đều cho tan, them nước cất vào
cho đến 100 ml
Dung dịch tinh bột 0,1%
Tinh bột 0,1 g
Nước cất thêm đến 100 ml
Trộn tinh bột với khoảng 10 ml nước cất, thêm tiếp 80 ml nước cất đang sôi,
khuấy đều, để nguội, thêm nước cất đến 100 ml.
Dung dịch casein 0,1%
Casein 0,1 g
NaOH 0,1N 5 ml
Nước cất 25 ml
Đun cách thủy cho đến khi tan hoàn toàn. Làm lạnh dùng HCl 0,1N chỉnh
pH = 8. Thêm nước cất để đủ 100 ml.
Nước muối 0,1%
Cân 0,1 g muối NaCl hòa tan trong 100 ml nước cất.
Dung dịch acid acetic 1% trong ethanol
Acid acetic đặc 1 ml
Nước cất 49 ml
Ethanol 96% 50 ml
Hòa tan acid acetic đặc trong nước cất và ethanol.
 Phƣơng pháp nhuộm Gram
Các bước tiến hành :
Phết canh khuẩn lên miếng lam
Cố định mẫu bằng cách hơ qua ngọn đèn cồn
Đặt giấy lọc lên vết phết vi khuẩn

Kết quả:
Phản ứng (-): môi trường có màu hồng đỏ
Phản ứng (+): môi trường có màu vàng
 Thử phản ứng Catalase
Chuẩn bị:
Dung dịch H
2
O
2
30%
Lame
Giống vi khuẩn Bacillus subtilis
Cách làm: dung piptte lấy một ít vi khuẩn, phết lên giữa lame kính sạch và
khô. Sau đó nhỏ giọt H
2
O
2
30% lên vết vi khuẩn. Đọc kết quả su khoảng 15 giây.
Kết quả:
Phản ứng (-): không có hiệ tượng sủi bọt
Phản ứng (+): có hiện tượng sủi bọt
 Thử phản ứng VP (Voges Proskauer)
Chuẩn bị:
Giống vi khuẩn Bacillus subtilis
Môi trường Clark lubs
α – naphtol 10%, NaOH 40%
Cách làm: cấy vi khuẩn vào môi trường Clark lubs, nuôi ở nhiệt độ

C/24 giờ. Sau 24 giờ nhỏ vào môi trường 2 – 3 giọt Giess
A, sau đó nhỏ tiếp 2 – 3 giọt Giess B.
Kết quả:
Phản ứng (-): môi trường có màu vàng
Phản ứng (+): môi trường có màu đỏ
 Thử khả năng sử dụng Citrate
Chuẩn bị:
Môi trường Citrate
Giống vi khuẩn Bacillus subtilis
Cách làm: cấy vi khuẩn vào môi trường Citrate. Nuôi ở nhiệt độ 37
0
C/24
giờ.
Kết quả:
Phản ứng (-): môi trường có màu xanh lá mạ non
Phản ứng (+): môi trường có màu xanh dương
 Các phƣơng pháp thực hiện
 Phương pháp kiểm tra hoạt tính amylase (Phương pháp Wolhgemuth)
Phương pháp này xác định lượng enzyme ít nhất có thể phân giải hoàn toàn
lượng tinh bột với chất chỉ thị màu Iodine.
Một đơn vị Wolhgemuth là lượng enzyme ít nhất mà sau 30 phút ở 30
0
C,
khi có ion clorine có thể phân giải 1 mg tinh bột đến các sản phẩm không tạo màu
với Iodine. Hoạt tính của enzyme được biểu diễn bằng số đơn vị Wolhgemuth trên
1 ml dịch môi trường hoặc 1 ml dung dịch chiết enzyme.
Thiết bị, vất liệu và hóa chất:
Bình tam giác hay bình cầu
Ống nghiệm
Máy ly tâm hay máy lọc

 Phương pháp kiểm tra hoạt tính protease (Phương pháp Gross và
Fluld)
Trong môi trường kiềm yếu, casein bị hòa tan nhưng khi thêm acid acetic
trong ethanol, casein bị kết tủa. Trái lại, các sản phẩm thủy phân của casein lại
không bị kết tủa trong điều kiện này. Phương pháp Gross và Fluld dựa trên cơ sở
xác định lượng enzyme ít nhất cần thiết để phân giải 2 mg casein đến mức không bị
kết tủa bởi acid acetic trong ethanol.
Một đơn vị hoạt động là lượng enzyme 1ml dung dịch nghiên cứu có khả
năng phân giải 1 mg casein ở 38
0
C trong thời gian 30 phút.
 Thiết bị, vật liệu và hóa chất
Bể điều nhiệt hay tủ ấm (38
0
C)
Máy lắc ống nghiệm (vortex mixer)
Ống nghiệm
Dung dịch casein 0,1%
Dung dịch acid acetic 1% trong ethanol
 Cách tiến hành:
Chuẩn bị 12 ống nghiệm sạch, khô
Cho vào mỗi ống 1ml nước cất, trừ ống thứ nhất.
Cho vào ống thứ nhất và ống thứ hai mỗi ống 1 ml dịch chứa enzyme, lắc
đều. Chuyển 1 ml dung dịch của ống thứ hai vào ống thứ ba, lắc đều. Chuyển 1 ml