Sàng lọc và phân tích đặc điểm phân tử các đột
biến FLT3 xuất hiện trên bệnh nhân mắc bệnh
ung thư bạch cầu cấp dòng tủy ở Việt Nam Đỗ Thị Thanh Trung

Trường Đại học Khoa học Tự nhiên. Đại học Quốc gia Hà Nội
Luận văn Thạc sĩ ngành: Sinh học; Mã số : 60 42 01 14
Người hướng dẫn: TS. Phạm Bảo Yên
Năm bảo vệ: 2014 Abstract. Đã thiết lập được quy trình phát hiện các đột biến trên gen FLT3-ITD gây
ung thư bạch cầu cấp dòng tủy (đã được chuyển giao cho cơ sở y tế). Sàng lọc quy mô
phòng thí nghiệm cho thấy: tỷ lệ mẫu chứa đột biến gen FLT3-ITD là 15/200 mẫu,
chiếm 7,5% bệnh nhân AML. Trong mỗi mẫu chứa đột biến, có từ 1-2 đoạn lặp, mức độ
đột biến ở các mẫu là từ 25 - 70%. Đoạn lặp và đoạn gốc nằm cạnh nhau. Bước đầu
thiết lập được quy trình và thử nghiệm sàng lọc đột biến FLT3-TKD ở một số mẫu

Keywords. Sàng lọc; Phân tử; Đột biến gen; Ung thư bạch cầu; Sinh học thực nghiệm

Content
chuỗi polymerase (PCR) 27
2.2.4. Điện di agarose hoặc acrylamide để phân tích phổ băng đột biến 28
2.2.6. Nhân dòng đoạn gen FLT3 và đọc trình tự gen bằng phương pháp
Sanger 28
2.2.7. Một số phần mềm sử dụng trong luận văn 30
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31
3.1. Thu thập và tách chiết ADN hệ gen từ mẫu máu tổng số 31
3.2. Thiết kế và tối ƣu quy trình phát hiện đột biến gen FLT3-ITD 32
3.2.1. Thiết kế trình tự mồi 32
3.2.2. Thiết kế và tối ưu quy trình phát hiện đột biến FLT3-ITD 33
3.3. Bƣớc đầu sàng lọc trong quy mô phòng thí nghiệm 36
3.4. Kết quả đƣa sản phẩm PCR vào vectơ tái tổ hợp 37
3.5. Phân tích các đặc điểm phân tử của đột biến gen FLT3-ITD 40
3.5.1. Số lượng đột biến gen FLT3-ITD trong một mẫu (số đột biến/mẫu) 40
3.5.2. Kích thước đột biến 40
3.5.3. Trình tự đột biến 44
3.5.4. Mức độ đột biến 45
KẾT LUẬN 47
KIẾN NGHỊ 47
TÀI LIỆU THAM KHẢO 48
TÀI LIỆU THAM KHẢO

Tiếng Việt

1. Kiều Thị Vân Anh, Vũ Minh Phương, Nguyễn Thiên Lữ, Phạm Quang Vinh
(2012), “Bước đầu nghiên cứu gen NPM1 - muta và FLT3-ITD trên bệnh
nhân Lơ xê mi cấp dòng tủy”, Y học Việt Nam, 392, tr.64-68.

thai adult acute myeloid leukemia, in Faculty of Graduate Studies. 2008,
Mahidol: Mahidol University. p. 133.
10. Busque L. and Gilliland D.G. (1993), “Clonal evolution in acute myeloid
leukemia”, Blood, 82 (2), pp. 337-342.
11. Cairoli R., Beghini A., Grillo G., Nadali G., Elice F., Ripamonti C.B.,
Colapietro P., Nichelatti M., Pezzetti L., Lunghi M., Cuneo A., Viola A.,
Ferrara F., Lazzarino M., Rodeghiero F., Pizzolo G., Larizza L., and Morra
E. (2006), “Prognostic impact of c-KIT mutations in core binding factor
leukemias: an Italian retrospective study”, Blood, 107 (9), pp. 3463-3468.
12. Clark J.J., Cools J., Curley D.P., Yu J.C., Lokker N.A., Giese N.A., and
Gilliland D.G. (2004), “Variable sensitivity of FLT3 activation loop
mutations to the small molecule tyrosine kinase inhibitor MLN518”, Blood,
104 (9), pp. 2867-2872.
13. Cools J., Mentens N., Furet P., Fabbro D., Clark J.J., Griffin J.D., Marynen
P., and Gilliland D.G. (2004), “Prediction of resistance to small molecule
FLT3 inhibitors: implications for molecularly targeted therapy of acute
leukemia”, Cancer research, 64 (18), pp. 6385-6389.
14. Dohner K., Schlenk R.F., Habdank M., Scholl C., Rucker F.G., Corbacioglu
A., Bullinger L., Frohling S., and Dohner H. (2005), “Mutant nucleophosmin
(NPM1) predicts favorable prognosis in younger adults with acute myeloid
leukemia and normal cytogenetics: interaction with other gene mutations”,
Blood, 106 (12), pp. 3740-3746.

15. Falini B., Mecucci C., Tiacci E., Alcalay M., Rosati R., Pasqualucci L., La
Starza R., Diverio D., Colombo E., Santucci A., et al. (2005), “Cytoplasmic
nucleophosmin in acute myelogenous leukemia with a normal karyotype”,
New England Journal of Medicine, 352 (3), pp. 254-266.
16. Fröhling S., Scholl C., Levine R.L., Loriaux M., Boggon T.J., Bernard O.A.,
Berger R., Döhner H., Döhner K., Ebert B.L., et al. (2007), “Identification of
driver and passenger mutations of FLT3 by high-throughput DNA sequence

Y K., Kim H J., Sohn S., Kim S., Lee W., Kim K., Mun Y C., Kim H.,
Park J., Min W S., Kim H J., and Kim D. (2013), “KIT D816 mutation
associates with adverse outcomes in core binding factor acute myeloid
leukemia, especially in the subgroup with RUNX1/RUNX1T1
rearrangement”, Ann Hematol, 92 (2), pp. 163-171.
25. Kim Y.K., Kim H.N., Lee S.R., Ahn J.S., Yang D.H., Lee J.J., Lee I.K., Shin
M.G., and Kim H.J. (2010), “Prognostic significance of nucleophosmin
mutations and FLT3 internal tandem duplication in adult patients with
cytogenetically normal acute myeloid leukemia”, Korean Journal of
Hematology, 45 (1), pp. 36-45.
26. Kiyoi H., Naoe T., Nakano Y., Yokota S., Minami S., Miyawaki S., Asou N.,
Kuriyama K., Jinnai I., Shimazaki C., Akiyama H., Saito K., Oh H., Motoji
T., Omoto E., Saito H., Ohno R., and Ueda R. (1999), “Prognostic
implication of FLT3 and N-RAS gene mutations in acute myeloid leukemia”,
Blood, 93 (9), pp. 3074-3080.
27. Kiyoi H., Towatari M., Yokota S., Hamaguchi M., Ohno R., Saito H., and
Naoe T. (1998), “Internal tandem duplication of the FLT3 gene is a novel
modality of elongation mutation which causes constitutive activation of the
product”, Leukemia, 12 (9), pp. 1333-1337.
28. Kohler G. and Milstein C. (1975), “Continuous cultures of fused cells
secreting antibody of predefined specificity”, Nature, 256 (5517), pp. 495-
497.

29. Kronke J., Bullinger L., Teleanu V., Tschurtz F., Gaidzik V.I., Kuhn M.W.,
Rucker F.G., Holzmann K., Paschka P., Kapp-Schworer S., et al. (2013),
“Clonal evolution in relapsed NPM1-mutated acute myeloid leukemia”,
Blood, 122 (1), pp. 100-108.
30. Lee B.H., Tothova Z., Levine R.L., Anderson K., Buza-Vidas N., Cullen
D.E., Mcdowell E.P., Adelsperger J., Frohling S., Huntly B.J., Beran M.,
Jacobsen S.E., and Gilliland D.G. (2007), “FLT3 mutations confer enhanced

Rocnik J.L., Lange B.J., Gilliland D.G., and Radich J.P. (2008), “Structural
and numerical variation of FLT3/ITD in pediatric AML”, Blood, 111 (10),
pp. 4930-4933.
38. Murphy K.M., Levis M., Hafez M.J., Geiger T., Cooper L.C., Smith B.D.,
Small D., and Berg K.D. (2003), “Detection of FLT3 internal tandem
duplication and D835 mutations by a multiplex polymerase chain reaction
and capillary electrophoresis assay”, Journal of Molecular Diagnostic, 5 (2),
pp. 96-102.
39. Nadler L.M., Stashenko P., Hardy R., Kaplan W.D., Button L.N., Kufe
D.W., Antman K.H., and Schlossman S.F. (1980), “Serotherapy of a patient
with a monoclonal antibody directed against a human lymphoma-associated
antigen”, Cancer research, 40 (9), pp. 3147-3154.
40. Nakao M., Janssen J.W., Erz D., Seriu T., and Bartram C.R. (2000),
“Tandem duplication of the FLT3 gene in acute lymphoblastic leukemia: a
marker for the monitoring of minimal residual disease”, Leukemia, 14 (3),
pp. 522-524.
41. Noguera N.I., Ammatuna E., Zangrilli D., Lavorgna S., Divona M.,
Buccisano F., Amadori S., Mecucci C., Falini B., and Lo-Coco F. (2005),
“Simultaneous detection of NPM1 and FLT3-ITD mutations by capillary
electrophoresis in acute myeloid leukemia”, Leukemia, 19 (8), pp. 1479-
1482.

42. Pressman D. and Korngold L. (1953), “The in vivo localization of anti-
Wagner-osteogenic-sarcoma antibodies”, Cancer, 6 (3), pp. 619-623.
43. Ravandi F., Alattar M.L., Grunwald M.R., Rudek M.A., Rajkhowa T., Richie
M.A., Pierce S., Daver N., Garcia-Manero G., Faderl S., et al. (2013), “Phase
2 study of azacytidine plus sorafenib in patients with acute myeloid leukemia
and FLT-3 internal tandem duplication mutation”, Blood, 121 (23), pp. 4655-
4662.
44. Renneville A., Roumier C., Biggio V., Nibourel O., Boissel N., Fenaux P.,

identification of subgroups with poor prognosis”, Blood, 99 (12), pp. 4326-
4335.
52. Vardiman J.W., Harris N.L., and Brunning R.D. (2002), “The World Health
Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms”, Blood, 100
(7), pp. 2292-2302.
53. Vardiman J.W., Thiele J., Arber D.A., Brunning R.D., Borowitz M.J., Porwit
A., Harris N.L., Le Beau M.M., Hellstrom-Lindberg E., Tefferi A., and
Bloomfield C.D. (2009), “The 2008 revision of the World Health
Organization (WHO) classification of myeloid neoplasms and acute
leukemia: rationale and important changes”, Blood, 114 (5), pp. 937-951.
54. Yamamoto Y., Kiyoi H., Nakano Y., Suzuki R., Kodera Y., Miyawaki S.,
Asou N., Kuriyama K., Yagasaki F., Shimazaki C., et al. (2001), “Activating
mutation of D835 within the activation loop of FLT3 in human hematologic
malignancies”, Blood, 97 (8), pp. 2434-2439.

Website:

55. https://www.healthbase.com/hb/cm/leukemia-leukaemia-types-acute-chronic-
symptoms-treatment-chemotherapy-radiotherapy-immunotherapy-stem-cell-
transplant-targeted-therapy-cost-abroad-medical-tourism.html

56. http://www.webmd.com/cancer/tc/leukemia-topic-overview