THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
BÁO CÁO THỰC HÀNH
BÀI 4:

PHƯƠNG PHÁP NHUÔM MÀU
VI SINH VẬT
I. NGUYÊN TẮC
Nhuộm màu là quá trình làm cho tế bào hoặc các thành phần của tế bào vi sinh vật
có màu dưới tác dụng của các loại thuốc nhuộm.
1. MỤC ĐÍCH
• Giúp việc quan sát hình dạng tế bào, các thành phần cấu trúc tế bào của vi
sinh vật được dễ dàng.
• Giúp phân biệt các chủng vi sinh vật với nhau do việc ăn màu khác nhau đối
với các loại thuốc nhuộm tạo điều kiện cho việc phân loại, định dạng vi sinh
vật ( nhuộm màu Gram ).
2. PHÂN LOẠI
Trần Thanh Tùng | MSSV:
10243221
Nhuộm màu vi
sinh vật
Nhuộm không cố địnhNhuộm cố định
Nhuộm đơn Nhuộm kép
Nhuộm tiên mao
Nhuộm bào tử
Nhuộm Ziehl -
Neelsen
Nhuộm Gram
THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
Ở bài này sẽ tìm hiểu quá trình nhuộm không cố định và phương pháp
nhuộm Gram thuộc phương pháp nhuộm cố định.
II. DỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT

Tẩy cồn
Rửa nước
Phủ lugol
Rửa nước
Phủ tím kết tinh
( Crystal violet )
1phút
1phút
15s
15s
15s
1phút
15s
THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
Thứ tự Thuốc thử Gram ( + ) Gram ( - )
1
Crystal Violet 1’
Tím Tím
Rửa nước 15’’
2
Lugol 1’
Tím Tím
Rửa nước 15’’
3
Tẩy màu 5 - 15’’
Tím Không màu
Rửa nước 15’’
4
Saranin 1’
Tím Hồng

( Nhuộm Gram – Gram âm)
Nêu ít nhất 5 nguyên nhân khi nhuộm vi khuẩn Gram ( + ) cho kết quả vi
khuẩn Gram ( - ) và ngược lại.
5 nguyên nhân khi nhuộm vi khuẩn Gram dương cho kết quả vi khuẩn Gram âm ( vi
khuẩn Gram dương có màu hồng ):
• Thời gian tẩy màu quá lâu làm cho phức chất tím kết tinh – iot bị rửa trôi.
• Lứa cấy quá già, vì tế bào già thường mất khả năng giữ màu thuốc nhuộm
tím kết tinh khi tẩy bằng ethanol.
• Dung dịch lugol bị hỏng nên không tạo được phức với dung dịch tím kết tinh,
kết quả sẽ bị tẩy màu khi dùng dung dịch tẩy mảu.
• Thời gian bắt màu thuốc nhuộm tím kết tinh chưa đủ lâu.
• Thời gian để dung dịch lugol tạo phức với dung dịch tím kết tinh chưa đủ.
5 nguyên nhân khi nhuộm vi khuẩn Gram âm cho kết quả vi khuẩn Gram dương ( vi
khuẩn Gram âm có màu tím ):
• Cố định tiêu bản khi còn ướt , các hợp chất protein có trong môi trường hoặc
trong mẫu thử làm tiêu bản khó tẩy màu.
• Thời gian tẩy màu quá nhanh khiến màu tím của dung dịch tím kết tinh
chưa thoát ra hết.
Trần Thanh Tùng | MSSV:
10243221
THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
• Thời gian bắt màu thuốc nhuộm tím kết tinh quá lâu.
• Thời gian để dung dịch lugol tao phức với dung dịch tím kết tinh quá lâu.
• Quá trình cố định mẫu chưa đủ thời gian cộng với quá trình rửa bằng nước
quá lâu hoặc rửa trực tiếp vào mẫu khiến cho vi khuẫn gram âm bị rửa trôi.
Trần Thanh Tùng | MSSV:
10243221