THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
BÁO CÁO THỰC HÀNH
BÀI 14

ĐỊNH LƯỢNG TỔNG VI KHUẨN HIẾU
KHÍ TRONG THỰC PHẨM BẰNG
PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN
LẠC
I. NGUYÊN TẮC
Tổng số vi khuẩn hiếu khí là tổng số những vi khuẩn thuộc nhóm vi khuẩn hiếu khí
tồn tại trong môi trường. Tổng số các nhóm vi khuẩn này trong thực phẩm có thể
xác định bằng phương pháp nuôi cấy trải lên bề mặt thạch hoặc bằng phương pháp
tạo hộp đổ. Thông qua số lượng khuẩn lạc đếm được trên các đĩa peptri cho phép
xác định được lượng vi sinh vật còn có khả năng sinh trưởng trong môi trường
trong mẫu ban đầu.
Để đếm kết quả chính xác thì số vi khuẩn trong đĩa phải trong giới hạn 25-250
khuẩn lạc. Nếu vượt quá giới hạn thì phải tiến hành pha loãng và chọn những độ
pha loãng lớn hơn.
Chỉ tiêu tổng số vi sinh vật hiếu khí được dùng để đánh giá chất lượng của mẫu về vi
sinh vật, nguy cơ hư hỏng, thời hạn bảo quản của sản phẩm, mức độ vệ sinh trong
quá tr ìn h c h ế b iế n , b ả o q u ả n sả n p h ẩ m .
II. DỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG, HÓA CHẤT
Môi trường sử dụng: Plate count agar (PCA), pH = 7.0 ± 0.2
• Casein peptone: 5.0g
• Cao nấm men: 2.5g
• Dextrose: 1.0g
• Agar: 15.0g
• Nước cất đủ 1000ml
Môi trường được nấu sôi cho tan agar, phân phối vào bình tam giác, hấp tiệt trùng
ở 121
o

Mẫu
Đồng nhất
Pha loãng
Hộp trảiHộp đổ
Ủ 37
o
C
(24 – 72h)
Tính kết quả
Đếm khuẩn lạc
( 25 ≤ n ≤ 250 )
THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
4.1. Cách đếm
Hình 14.3 Các thiết bị đếm khuẩn lạc
Cách đếm thủ công:
• Lấy bút chì kẻ hai đường vuông góc ở đáy hộp petri và đánh dấu thứ tự
từng vùng I, II, III, IV.
• Đếm số lượng khuẩn lạc từng vùng. Nhớ đánh dấu các khuẩn lạc đã đếm.
4.2. Công thức tính:
N(CFU / g hay CFU / ml) =
)11
(
ii
vdnvdn
C
++
∑
Trong đó:
• N: số tế bào ( đơn vị hình thành khuẩn lạc ) vi khuẩn trong 1 g hay 1 ml mẫu
(CFU: colony forming units);

THỰC HÀNH VI SINH ĐẠI CƯƠNG
CẤY THEO PHƯƠNG PHÁP TẠO HỘP ĐỔ:
• Pha loãng dịch huyền phù ở các nồng độ khác nhau: 10
-3
, 10
-4
, 10
-5
để cấy
mẫu.
• Ghi vào nắp đỉa petri có môi trường thạch các thông tin: nồng độ pha loãng,
ngày cấy.
• Dùng pipette đã vô trùng lấy 1 ml dịch huyền phù cho vào mỗi đỉa petri (đã
vô trùng).
• Cho khoảng 15ml môi trường PCA ở nhiệt độ khoảng 45
o
C vào hộp đĩa petri.
Xoay chậm cho hỗn hợp trộn đều. Để yên cho nguội. Lật ngược cho vào tủ
ấm. Nuôi cấy ở 30
o
C trong 72h.
• Mỗi mẫu cấy ba nồng độ. Mỗi nồng độ cấy ba hộp petri.
• Sau đó lấy ra kiểm tra kết quả.
PHƯƠNG PHÁP CẤY BỀ MẶT
• Dịch huyền phù được chuẩn bị tương tự như phương pháp tạo hộp đổ.
• Môi trường PCA sau khi được hấp tiệt trùng, được làm nguội đến khoảng 50
– 60
o
C sau đó đổ vào đĩa petri vô trùng.
• Đĩa petri chứa môi trường được làm khô bề mặt bằng cách sấy trong tủ sấy

45
0
C.
o Không xác định được hình dạng khuẩn lạc nhất định.
o Khó đếm do khuẩn lạc chồng lặp.

6
TRẦN THANH TÙNG – MSSV: 10243221| GVHD: Thầy TRƯƠNG VÕ ANH DŨNG