“KHẢO SÁT GIÁ TRỊ
Multiplex Real Time PCR
TRONG CHẨN ĐOÁN
NHIỄM KHUẨN HUYẾT”

BCV: BS. Nguyễn Thị Hằng
BỆNH VIỆN PHÁPLOGO
VIỆT
1


ĐẶT VẤN ĐỀ
NKH là một bệnh nhiễm
khuẩn cấp tính, gây ra do
vi khuẩn lưu hành trong
máu.
Có tỷ lệ tử vong cao.
Việc chẩn đoán sớm và
chính xác tác nhân gây
bệnh sẽ giúp điều trị
nhanh chóng và thích
hợp, giúp giảm chi phí
điều trị và tỷ lệ tử vong.
2


ĐẶT VẤN ĐỀ
Thời gian
chờ đợi
kết quả


ÂM
TÍNH
GIẢ
DO KIT

GIẢM TỈ
LỆ TỬ
VONG
4


MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU

 Xác định tỉ lệ dương tính vi sinh vật được
định danh bằng kỹ thuật MRT- PCR ở bệnh
nhân được chẩn đoán NKH.
 Đánh giá giá trị của xét nghiệm định danh vi
sinh vật bằng kỹ thuật MRT-PCR ở bệnh
nhân được chẩn đoán NKH bằng cách so
sánh với kỹ thuật cấy máu cổ điển.

5


ĐỐI TƯỢNG và PHƯƠNG PHÁP NC
 91 trường hợp bệnh
nhân người lớn tại
khoa cấp cứu và
khoa hồi sức tích
cực, bệnh viện FVTP Hồ Chí Minh từ


Ủ QUA
ĐÊM
(1224H)

DƯƠNG

ĐỊNH
DANH VI
SINH VẬT
(VITEK 2)

MRTPCR
(CFX)

6


PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
Phổ các vi sinh vật của bộ kit MRT-PCR trong nghiên cứu bao

gồm các vi khuẩn như sau:
 Các vi khuẩn Gram âm: Escherichia coli, Klebsiella
pneumoniae,

baumanii,

Pseudomonas

Salmonella

Thành phần của 1 phản ứng PCR: 10 µl Master Mix
Qiagen; 0,1 µl mồi R; 0,1 µl mồi F; 0,05 µl taqman probe;

nước khử ion 4,75 µl; 5 µl DNA 10-20 ng/µl chiết tách.
 Chương trình nhiệt phản ứng PCR: 95oC/ 15 phút; {95oC/
30 giây, 60oC/ 60 giây} x 40 chu kỳ.

8


KẾT QUẢ: TỈ LỆ DƯƠNG TÍNH




Tỉ lệ dương tính của cấy máu cao hơn tỉ lệ dương tính của
PCR/ống máu (p=0,0002).
Tỉ lệ dương tính của cấy máu và tỉ lệ dương tính của
PCR/chai cấy không khác nhau có ý nghĩa (p=0.5519).
9


SO SÁNH TỈ LỆ DƯƠNG TÍNH
Tỉ lệ dương tính của cấy máu và MRT_PCR

80
70

% dương tính



Tỉ lệ PCR/ống máu dương tính của chúng tôi ở mức trung gian
Các tác giả khác không thực hiện PCR/chai cấy
10


VI SINH VẬT GÂY NKH
Chai cấy
Vi khuẩn

PCR/ống máu

PCR/chai cấy

số lượng

%

số lượng

%

số lượng

%

Escherichia coli

21


1

4,5

3

7,3

Acinetobacter baumanii

1

2,3

0

0,0

1

2,4

Burkhoderia pseudomallei

1

2,3

0


1

2,4

Staphylococcus caprae

1

2,3

0

0,0

0

0,0

Staphylococcus capitis

1

2,3

0

0,0

0


Streptococcus group A

1

2,3

0

0,0

1

2,4

Streptococcus group B

1

2,3

1

4,5

1

2,4

Enterococcus faecium


100

22

100

41

100

11


VI SINH VẬT GÂY NKH






E. coli chiếm tỉ lệ cao nhất (47.7%)
K. pneumoniae (11,4%)
S.aureus (6,8%) và Salm sp (6,8%)
Các vi khuẩn khác chiếm tỉ lệ thấp
12


TƯƠNG HỢP GIỮA CẤY MÁU VÀ PCR/ống máu
23 ca (25,6%) không tương
hợp (CM+/PCR-)



TƯƠNG HỢP GIỮA CẤY MÁU VÀ PCR
100
90

14,4
3,0

5
10

7,0
6,7

0

4,4
8,8

25,6

80
70

47,2

Tỉ lệ %

60

22,2

8,6

0

Westh H [9]

Nora Schaub
[7]

Leonella
Pasqualini [4]

Chúng tôi
PCR/ống máu

Chúng tôi
PCR/chai cấy

Tỉ lệ % tương hợp giữa cấy máu và PCR




Chúng tôi có tỉ lệ cấy+/PCR+ cao
tỉ lệ cấy+/PCR- trong trường hợp làm PCR/ống máu, kết
quả của chúng tôi (25,6%) cao hơn các tác giả khác
(p=0.0036)


85

86,8

86,3
74,4

Tương hợp

30
20
10
0
Westh H [9]

Nora Schaub [7]

Leonella
Pasqualini [4]

Chúng tôi
PCR/ống máu

Chúng tôi
PCR/chai cấy

Tương hợp giữa cấy máu và PCR




17


KẾT LUẬN
1. Tỷ lệ dương tính của CM và tỷ lệ dương tính của PCR/chai cấy ủ
qua đêm (từ 12-24 giờ) không khác nhau có ý nghĩa (p=0,5519).
Kỹ thuật MRT-PCR/chai máu làm tăng tỷ lệ dương tính so với
MRT-PCR/ống máu có ý nghĩa thống kê (p= 0,0004). PCR/chai
cấy có tỷ lệ tương hợp với CM cao hơn tỷ lệ tương hợp của

PCR/ống máu với CM có nghĩa thống kê (p= 0,0351).
2. Thời gian trả kết quả của MRT-PCR ngắn hơn nhiều so với CM
(p=0,0024).

3. Lượng máu lấy để làm MRT-PCR rất nhỏ so với lượng máu lấy để
CM.

18


Xxi

19