BÁO CÁO KẾT QUẢ THỰC TẬP.
Họ và tên sinh viên: HOÀNG THỊ DUNG lớp K33C – Sinh, khóa
2007 – 2011.
Họ và tên người hướng dẫn khoa học: TS.Lê Xuân Đắc
Đơn vị công tác: Viện công nghệ sinh học.
Địa điểm thực tập: Viện công nghệ sinh học, 18 Hoàng Quốc Việt -
Hà Nội.
Thời gian thực tập: Từ 14/02/2011 đến 24/04/2011.
1. Mục đích – mục tiêu thực tập
- Các kỹ thuật cơ bản về nuôi cấy mô và tế bào thực vật.
- Kỹ thuật nhân nhanh cây ngưu tất trong ống nghiệm
2. Nội dung và kỹ năng cần đạt được trong đợt thực tập.
Nội dung cần thực tập.
- Pha hóa chất, làm môi trường nuôi cấy trong ống nghiệm
- Tạo đa trồi cây ngưu tất
- Tạo cây hoàn chỉnh, trồng cây ngoài vườn ươm.
Các kỹ thuật cần đạt được trong thời gian thực tập
Các kỹ thuật cơ bản phòng thí nghiệm nuôi cấy mô và tế bào thực. vật
(chuẩn bị làm môi trường, nuôi cấy cây trong ống nghiệm, trồng cây
ngoài vườn ươm …).
3. Các công việc đã thực hiện và kết quả thu được.
3.1.Phương pháp pha hóa chất trong nuôi cấy mô và tế bào thực vật
31.1. Mục đích
Giúp học sinh nắm vững phương pháp pha một số hóa chất cần thiết
sử dụng trong nuôi cấy mô và tế bào tực vật như: MS, các chất kích
thích sinh trưởng…
3.1.2. Nguyên lý
Hóa chât sau khi pha không kết tủa, không lắng cặn. háo chất đượ pha
thành dung dịch “stock” bảo quản trong tủ lạnh để sử dụng cho việc
pha môi trường nuôi cấy.
3.1.3. Dụng cụ và hóa chất

2
O cần thiết cho một lít môi trường nuôi cấy là
44
- Nếu pha stock loại cần 10 ml cho 1 lít môi trường nuôi cấy thì trong
10 ml dung dịch stock sẽ phải có 440 mg CaCl
2
.2H
2
O.
Trong 100 ml stock sẽ phải có 44000 mg CaCl
2
.2H
2
O
- Nếu pha loại cần 5 ml cho một lít môi trường nuôi cấy thì trong 5 ml
stock sẽ phải có 440 ml CaCl
2
.2H
2
O
Trong 500 ml dung dịch stock sẽ phải có 44000 mg CaCl
2
.2H
2
O
4.3. Pha các chất kích thích sinh trưởng:
Thường pha lượng ít (50 đến 100 ml một lần), vì các chất này khi ở
dạng dung dịch khó bảo quản. Các chất kích thích sinh trưởng như
BAP, NAA, 2,4 D…. ta có thể pha với nồng độ từ 0,2 đến 2 mg/ml.
Ví dụ: BAP là chất tan trong dung dịch NaOH 1N

- Dung dịch MSI, MSII,MSIII, MSIV, MSV
- Hoocmon kích thích sinh trưởng (2,4 –D, NAA, BAP….),
saccharose, agra….
4. Các bước tiến hành
1. Xác định công thức môi trường cần pha, tính thể tích các hóa
chất cần sử dụng.
Ví dụ: MS + 3% saccarose ) + 0,8% agra + 2mg 2,4 –D
2. Dùng ống đong để lấy các dung dịch MS
3. 3. Định mức nước cất đến thể tích cần pha, bổ sung saccharose
4. Đo pH (pH môi trường thường là 5,8)
5.Đun sôi, bổ sung agra, khuấy đều.
6. Bổ sung chất kích thích sinh trưởng
7. Chia đều cho các bình tam giác (mỗi bình khoảng 50 ml)
8. Làm nút bông, nút giấy
9. Khử trùng ở nhiệt độ 119 – 121
0
C, áp suất 0,8 – 1,2 at.
III. Tạo đa chôi cây ngưu tất
1. mục đích