TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP TP HCM
KHOA CÔNG NGHỆ HÓA HỌC

BÁO CÁO ĐỒ ÁN CHUYÊN NGÀNH
XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN C TRONG
VIÊN C SỦI BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG
HIỆU NĂNG CAO HPLC/DAD
GVGD: TS. Lê Đình Vũ
SVTH:
MSSV: 11050991
Lớp:

ĐHPT7
1


NỘI DUNG
1

Tổng quan lý thuyết

2

Thực nghiệm xác định hàm lượng vitamin C
trong viên C sủi bằng HPLC/DAD

3

Kết quả và thảo luận

2

CH2OH
Tính acid
Do hiệu ứng liên hợp của nhóm carboxyl, nên HO CHO
O
nguyên tử hydro của nhóm hydroxyl ở vị trí
số 3 trở nên rất linh động, làm cho vitamin C
HO: OH
có tính acid mạnh.
4


• Có thể định lượng acid ascorbic bằng phương pháp đo kiềm, chỉ
thị phenolphtalein, dung môi là nước.
• Người ta điều chế muối ascorbat natri để pha dung dịch tiêm có
nồng độ cao và trung tính.

• Tác dụng với muối kim loại cho muối mới.


Tính khử
• Việc oxy hoá acid ascorbic xảy ra ở hai mức độ khác nhau:
+ Sự oxy hoá khử thuận nghịch acid ascorbic thành acid
dehydroascorbic

Tính chất này vô cùng quan trọng đối với tác dụng sinh học của acid
ascorbic, nó tham gia vào các hệ enzym xúc tác các quá trình oxy hoá
khử xảy ra trong cơ thể.


+ Sự oxy hoá bất thuận nghịch acid ascorbic:

pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được
phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất
mang rắn, hay một chất mang đã được biến đổi bằng liên kết hoá
học với các nhóm chức hữu cơ .

Mobile phase
(Pha động)
Stationary phase
(Pha tĩnh)


- Quá trình tách dựa vào tính chất hóa học, vật lý và hóa lý của các
chất.
- Dựa trên 2 quá trình:
Hấp phụ
Giải hấp phụ
- Xảy ra liên tục giữa 2 pha:
Pha tĩnh: chất rắn hoặc lỏng, giữ chất phân tích
Pha động: chất lỏng (1 chất hoặc hỗn hợp nhiều chất), hòa tan và di
chuyển chất phân tích
- Sắc ký lỏng chia thành 2 nhóm
Sắc ký lỏng áp suất thường (sắc ký cổ điển)
Sắc ký lỏng áp suất cao (Sắc ký lỏng hiệu năng cao: HPLC)


Phân loại:
Dựa vào bản chất của quá trình sắc ký, HPLC chia thành:
SK
phân
bố

- Tuy nhiên theo kinh nghiệm thì chúng ta
ít khi sử dụng 04 đường dung môi cùng
một lúc mà chúng ta chi sử dụng tối đa là 3
và 2 đường để cho hệ pha động luôn được
pha trộn đồng nhất hơn,hệ pha độüng đơn
giản hơn để quá trình rửa giải ổn định .
- Hiện 04 đường dung môi phục vụ chủ
yếu cho việc rửa giải Gradial dung môi
theo thời gian và công tác xây dựng tiêu
chuẩn .

NGUỒN CUNG CẤP
PHA ĐỘNG (MOBILE
PHASE): LÀ BÌNH
ĐỰNG DUNG MÔI
HOẶC DUNG MÔI
CHẠY MÁY


(2) Bộ khử khí Degase
Mục đích của bộ khử khí nhằm loại trừ các bọt nhỏ còn sót lại
trong dung môi pha động .
Nếu như trong quá trình phân tích mà dung môi pha động còn
sót các bọt khí thì một số hiện tượng sau đây sẽ sảy ra:
- Tỷ lệ pha động của các đường dung môi lấy không đúng sẽ làm
cho thời gian lưu của Peak thay đổi .
- Trong trường hợp bọt quá nhiều bộ khử khí không thể loại trừ hết
được thì có thể Pump sẽ không hút được dung môi khi đó áp suất
không lên và máy sắc ký sẽ ngừng hoạt động .


CỘT TÁCH: LÀ NƠI XẢY RA CÁC
QUÁ TRÌNH TÁCH CHẤT, GỒM
CỘT PHÂN TÍCH VÀ CỘT BẢO VỆ

- Cột tách có kích cỡ khác
nhau
- Chiều dài: 10 – 25cm
- Đường kính: 2 – 5mm


(5) Cột tách
Cột chứa pha tĩnh được coi là trái tim của hệ thống sắc ký lỏng
hiệu năng cao.
- Cột pha tĩnh thông thường làm bằng thép không rỉ ,chiều dài cột
khoảng 10 -30cm ,đường kính trong 1-10mm ,hạt chất nhồi cỡ φ = 510 µm.(ngoài ra còn có một số trường hợp đặc biệt về kích thước và
kích cỡ hạt....)
- Với chất nhồi cột cỡ φ = 1.8 -5 µm có thể dùng cột ngắn ( 3-10
cm ) và nhỏ (đường kính trong 1-4.6 mm) loại cột này có hiệu năng
tách cao.
- Chất nhồi cột tùy theo lọai cột và kiểu sắc ký
- Thông thường chất nhồi cột là Silicagel (pha thuận)
hoặc là Silicagel đã được Silan hóa hoặc được bao một lớp mỏng
hữu cơ ( pha đảo ) , ngoài ra người ta còng dùng các loại hạt khác
như : Nhôm Oxit,Polyme xốp,chất trao đổi ion.
* Đối với một số phương pháp phân tích đòi hỏi phải có nhiệt độ cao
hoặc thấp hơn nhiệt độ phòng thì cột được đặt trong bộ phận điều
nhiệt (Oven column)


(6) Đầu dò (detector)

chất trong pha tĩnh và pha động

Mục đích chính của sắc ký là tách và định tính các chất trong hỗn hợp
chất phức tạp


• Quá trình tách diễn ra trong cột sắc ký

column
Vật liệu nhồi cột 3- 5µm


QÚA TRÌNH TÁCH

mixed sample
Mobile phase

column


Hỗn hợp chất tách khỏi
nhau thế nào ?

Flow

Pha tĩnh